Propõe-se um método para a determinação de Hg e Se em materiais biológicos por espectrometria de massa com plasma indutivamente acoplado e introdução da amostra por vaporização eletrotérmica após geração química de vapor (CVG-ETV-ICP-MS) e calibração por diluição isotópica. As amostras foram digeridas com água régia em um sistema convencional de microondas. As razões isotópicas usadas para quantificação foram: 201Hg/202Hg e 77Se/82Se. Borohidreto de sódio foi usado como agente redutor. As temperaturas de retenção e vaporização foram de 150 e 2000 °C, respectivamente. Seis materiais biológicos certificados foram analisados e as concentrações obtidas para Hg e Se foram concordantes com os valores certificados de acordo com o teste-t para um nível de confiança de 95%. Os limites de detecção obtidos foram 0,7 e 3 ng g-1 para Hg e Se, respectivamente. O método é preciso, exato e adequado para a análise de materiais biológicos em rotina e demonstra a viabilidade do uso da diluição isotópica no sistema proposto.