Dot-ELISA-IgM in saliva for the diagnosis of human leptospirosis using polyester fabric-resin as support (Preliminary Report)

Silva, Marcos Vinicius da; Nakamura, Paulo Mutuko; Camargo, Eide Dias; Batista, Luíza; Vaz, Adelaide José; Brandão, Angela Pires; Ferreira, Antonio Walter

doi:10.1590/S0036-46651994000500014

Abstracts

In order to improve the diagnosis of human leptospirosis, we standardized the dot-ELISA for the search of specific IgM antibodies in saliva. Saliva and serum samples were collected simultaneously from 20 patients with the icterohemorrhagic form of the disease, from 10 patients with other pathologies and from 5 negative controls. Leptospires of serovars icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis and cynopteri grown in EMJH medium and mixed together in equal volumes, were used as antigen at individual protein concentration of 0.2 µg/µl. In the solid phase of the test we used polyester fabric impregnated with N-methylolacrylamide resin. The antigen volume for each test was 1µl, the saliva volume was 8 µl, and the volume of peroxidase-labelled anti-human IgM conjugate was 30 µl. A visual reading was taken after development in freshly prepared chromogen solution. In contrast to the classic nitrocellulose membrane support, the fabric support is easy to obtain and to handle. Saliva can be collected directly onto the support, a fact that facilitates the method and reduces the expenses and risks related to blood processing.

Leptospirosis; Dot-ELISA; Polyester-resin; Solid-phase; Saliva

Com a finalidade de melhorar o diagnóstico da leptospirose humana, padronizou-se o teste dot-ELISA para a pesquisa de anticorpos específicos da classe IgM na saliva. Empregaram-se amostras de saliva e soro coletadas simultaneamente de 20 pacientes com a forma ictero-hemorrágica da doença, de 10 pacientes com outras patologias e 5 controles negativos. Culturas de Leptos-pira em meio EMJH, dos sorovares: icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis e cynopteri, foram utilizadas como antígeno, na concentração proteica individual de 0,2 µg/µl, misturadas em volumes iguais. Na fase sólida do teste empregou-se tecido de po-liéster impregnado com resina de N-metilol-acrilamida. O volume do antígeno para cada teste foi de 1µl, o de saliva 8µl, o de conjugado anti-IgM humana marcada com peroxidase, de 30µl. A leitura foi visual, após revelação em solução cromógena de preparo recente. O suporte de tecido é de fácil obtenção e manuseio, diferente do clássico de membrana de nitrocelulose. A saliva pode ser coletada diretamente sobre o suporte, o que facilita o método e diminui gastos e riscos inerentes à coleta e processamento do sangue.

PRELIMINARY REPORT

Dot-ELISA-IgM in saliva for the diagnosis of human leptospirosis using polyester fabric-resin as support (Preliminary Report)

Dot-ELISA-IgM em saliva para diagnóstico da leptospirose humana, empregando como suporte tecido de poliéster-resina (Nota Prévia)

Marcos Vinicius da Silva^I,II; Paulo Mutuko Nakamura^I; Eide Dias Camargo^I; Luíza Batista^II; Adelaide José Vaz^I; Angela Pires Brandão^I,IV; Antonio Walter Ferreira^III

^IInstituto Adolfo Lutz, Sao Paulo, Brasil

^IIInstituto de Infectologia Emílio Ribas, São Paulo, Brasil

^IIIInstituto de Medicina Tropical de São Paulo, Brasil

^IVFundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, Brasil

^{Correspondence to} Correspondence to: Dr. Marcos Vinicius da Silva Av. Dr. Arnaldo, 351/10º andar 01246-902 São Paulo, SP, Brasil

SUMMARY

In order to improve the diagnosis of human leptospirosis, we standardized the dot-ELISA for the search of specific IgM antibodies in saliva.

Saliva and serum samples were collected simultaneously from 20 patients with the icterohemorrhagic form of the disease, from 10 patients with other pathologies and from 5 negative controls. Leptospires of serovars icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis and cynopteri grown in EMJH medium and mixed together in equal volumes, were used as antigen at individual protein concentration of 0.2 µg/µl.

In the solid phase of the test we used polyester fabric impregnated with N-methylolacrylamide resin. The antigen volume for each test was 1µl, the saliva volume was 8 µl, and the volume of peroxidase-labelled anti-human IgM conjugate was 30 µl. A visual reading was taken after development in freshly prepared chromogen solution.

In contrast to the classic nitrocellulose membrane support, the fabric support is easy to obtain and to handle. Saliva can be collected directly onto the support, a fact that facilitates the method and reduces the expenses and risks related to blood processing.

Keywords: Leptospirosis; Dot-ELISA; Polyester-resin; Solid-phase; Saliva.

RESUMO

Com a finalidade de melhorar o diagnóstico da leptospirose humana, padronizou-se o teste dot-ELISA para a pesquisa de anticorpos específicos da classe IgM na saliva.

Empregaram-se amostras de saliva e soro coletadas simultaneamente de 20 pacientes com a forma ictero-hemorrágica da doença, de 10 pacientes com outras patologias e 5 controles negativos. Culturas de Leptos-pira em meio EMJH, dos sorovares: icterohaemorrhagiae, canicola, hebdomadis, brasiliensis e cynopteri, foram utilizadas como antígeno, na concentração proteica individual de 0,2 µg/µl, misturadas em volumes iguais.

Na fase sólida do teste empregou-se tecido de po-liéster impregnado com resina de N-metilol-acrilamida. O volume do antígeno para cada teste foi de 1µl, o de saliva 8µl, o de conjugado anti-IgM humana marcada com peroxidase, de 30µl. A leitura foi visual, após revelação em solução cromógena de preparo recente.

O suporte de tecido é de fácil obtenção e manuseio, diferente do clássico de membrana de nitrocelulose. A saliva pode ser coletada diretamente sobre o suporte, o que facilita o método e diminui gastos e riscos inerentes à coleta e processamento do sangue.

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Recebido para publicação 09/12/1993.

Aceito para publicação em 01/06/1994.

1. ADLER, B.; MURPHY, A.M.; LOCARNINI, S.A. & FAINE, S. - Detection of specific anti-leptospiral immunoglobulins M and G in human serum by solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay. J. clin. Microbiol., 11: 452-457, 1980.
2. BITTENCOURT, E.; GUIMARĂES, M.; CAMARGO, M.E.; FERREIRA, A.W. & MAKINO, M.M - Immunoassays conducted with resin treated nylon fabrics. J. Polymer Sci., Polymer Letters Edition, 21: 717-722, 1983.
3. BRADFORD, M.M. - A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding. Analyt. Biochem., 72: 248-254, 1983.
4. CAMARGO, M.E.; BITTENCOURT, E.; FERREIRA, A.W.; PERES, L. & CARVALHO, M.B. - Utilizaçăo de resinas sobre suportes inertes para fixaçăo covalente de componentes antigęnicos ou anticorpos, como fase sólida em testes sorológicos. In: JORNADA CIENTÍFICA DO INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SĂO PAULO, 2, Săo Paulo, 1983. Resumos. p. 21.
5. FAINE, S., ed. - Guidelines for the control of leptospirosis. Geneva, World Health Organization, 1982. (WHO Off Set Publication no. 67).
6. FEIGIN, R.D. & ANDERSON, D.C. - Human leptospirosis. Crit Rev. clin. Lab. Sci., 5: 413-467, 1975.
7. PERES, L. - Desenvolvimento e caracterizaçăo de imunosorventes e avaliaçăo de desempenho em ensaios imunoenzimáticos. Campinas, 1986. (Dissertaçăo de Mestrado - Faculdade de Engenharia Química da Universidade de Campinas).
8. SILVA, M.V.; CAMARGO, E.D.; VAZ, A.J. et al. - Teste imunoenzimático (ELISA) para detecçăo de anticorpos circulantes da classe IgM na leptospirose humana. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 30: 95-100, 1988.
9. SILVA, M.V.; CAMARGO, E.D.; VAZ, A.J. et al. - Imunodiagnóstico da leptospirose humana através do teste ELISA-IgM, empregando-se diferentes preparaçőes antigęnicas a partir de sorotipos prevalentes de Lepstospira interrogans. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 32: 233-239, 1990.
10. SILVA, M.V.; CAMARGO, E.D.; VAZ, A.J. & BATISTA, L. - Immunodiagnosis of human leptospirosis using saliva. Trans. roy. Soc. trop. Med. Hyg., 86: 560-561, 1992.
11. VAZ, A.J.; FERREIRA, A.W.; CAMARGO, M.E.; NAKAMURA, P.M. & CAMARGO, E.D. - Dot-ELISA for detection of anti-Cysticercus cellulosae antibodies in human cerebrospinal fluid using a new solid-phase (resin-treated polyester fabrics). Preliminary report. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 32: 355-359, 1990.

Correspondence to:

Dr. Marcos Vinicius da Silva

Av. Dr. Arnaldo, 351/10º andar

01246-902 São Paulo, SP, Brasil

Publication Dates

Publication in this collection
21 Sept 2006
Date of issue
Oct 1994

History

Accepted
01 June 1994
Received
09 Dec 1993

This work is licensed under a Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License.

[1] 1. ADLER, B.; MURPHY, A.M.; LOCARNINI, S.A. & FAINE, S. - Detection of specific anti-leptospiral immunoglobulins M and G in human serum by solid-phase enzyme-linked immunosorbent assay. J. clin. Microbiol., 11: 452-457, 1980.

[2] 2. BITTENCOURT, E.; GUIMARĂES, M.; CAMARGO, M.E.; FERREIRA, A.W. & MAKINO, M.M - Immunoassays conducted with resin treated nylon fabrics. J. Polymer Sci., Polymer Letters Edition, 21: 717-722, 1983.

[3] 3. BRADFORD, M.M. - A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein dye binding. Analyt. Biochem., 72: 248-254, 1983.

[4] 4. CAMARGO, M.E.; BITTENCOURT, E.; FERREIRA, A.W.; PERES, L. & CARVALHO, M.B. - Utilizaçăo de resinas sobre suportes inertes para fixaçăo covalente de componentes antigęnicos ou anticorpos, como fase sólida em testes sorológicos. In: JORNADA CIENTÍFICA DO INSTITUTO DE MEDICINA TROPICAL DE SĂO PAULO, 2, Săo Paulo, 1983. Resumos. p. 21.

[5] 5. FAINE, S., ed. - Guidelines for the control of leptospirosis. Geneva, World Health Organization, 1982. (WHO Off Set Publication no. 67).

[6] 6. FEIGIN, R.D. & ANDERSON, D.C. - Human leptospirosis. Crit Rev. clin. Lab. Sci., 5: 413-467, 1975.

[7] 7. PERES, L. - Desenvolvimento e caracterizaçăo de imunosorventes e avaliaçăo de desempenho em ensaios imunoenzimáticos. Campinas, 1986. (Dissertaçăo de Mestrado - Faculdade de Engenharia Química da Universidade de Campinas).

[8] 8. SILVA, M.V.; CAMARGO, E.D.; VAZ, A.J. et al. - Teste imunoenzimático (ELISA) para detecçăo de anticorpos circulantes da classe IgM na leptospirose humana. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 30: 95-100, 1988.

[9] 9. SILVA, M.V.; CAMARGO, E.D.; VAZ, A.J. et al. - Imunodiagnóstico da leptospirose humana através do teste ELISA-IgM, empregando-se diferentes preparaçőes antigęnicas a partir de sorotipos prevalentes de Lepstospira interrogans. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 32: 233-239, 1990.

[10] 10. SILVA, M.V.; CAMARGO, E.D.; VAZ, A.J. & BATISTA, L. - Immunodiagnosis of human leptospirosis using saliva. Trans. roy. Soc. trop. Med. Hyg., 86: 560-561, 1992.

[11] 11. VAZ, A.J.; FERREIRA, A.W.; CAMARGO, M.E.; NAKAMURA, P.M. & CAMARGO, E.D. - Dot-ELISA for detection of anti-Cysticercus cellulosae antibodies in human cerebrospinal fluid using a new solid-phase (resin-treated polyester fabrics). Preliminary report. Rev. Inst. Med. trop. S. Paulo, 32: 355-359, 1990.