Resumos
O objetivo deste estudo foi avaliar a aplicabilidade da pesquisa de anticorpos anti- Toxoplasma gondii e anti- Neospora caninum em amostras de leite bovino pela reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e sua concordância com a detecção desses anticorpos em amostras de soro sanguíneo, simultaneamente coletadas das mesmas vacas. No total, foram analisadas amostras correspondentes de soro sanguíneo e de leite de 177 vacas em início de lactação. Para o T. gondii, o diagnóstico no leite demonstrou concordância boa e sensibilidade baixa, quando comparado ao soro sanguíneo com título de anticorpos séricos ≥64 (ponto de corte). Quanto ao N. caninum, obteve-se concordância excelente entre a detecção de anticorpos no soro sanguíneo com título ≥50 (considerado ponto de corte para termos de diagnóstico) e no leite, com sensibilidade de 80,7% e especificidade de 100%, no entanto, para as vacas com títulos de anticorpos ≥100 no soro sanguíneo, a sensibilidade e a especificidade foram de 100%. Nas condições do presente estudo, demonstrou-se que a RIFI não é indicada para diagnóstico da toxoplasmose em amostras de leite bovino, devido ao alto percentual de vacas soropositivas para anticorpos anti-T. gondii no soro sanguíneo diluído 1:64, em cujas amostras de leite não houve detecção desses anticorpos. Por outro lado, a RIFI é um teste viável para o diagnóstico da neosporose bovina, especialmente considerando como ponto de corte um título de anticorpos séricos ≥100, podendo ser recomendável pela praticidade de coleta da amostra como parte de programas de saúde dos rebanhos e estudos epidemiológicos
RIFI; sorologia; neosporose; toxoplasmose; vacas leiteiras
This study aimed to evaluate: the applicability search for anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum antibodies in cattle milk samples by indirect fluorescent antibody test (IFAT), and their concordance with detection of the same antibodies in blood serum samples, simultaneously collected from the same cows. A total of 177 cows in the beginning of lactation provided corresponding samples of blood serum and milk. To T. gondii, milk diagnosis demonstrated good conformity and low sensitivity in comparison with blood samples whose serum antibody titer ranged ≥64 (cut-off point). As for N. caninum it was obtained optimum conformity between the detection of blood serum antibodies, with titer ranging ≥50 (diagnose-aimed cut-off point) and milk, with sensitivity reaching 80.7% and 100% specificity. However, sensitivity and specificity reached 100% for cows whose antibodies titers in blood serum ranged ≥100. The study was able to demonstrate that IFAT is not indicate to diagnose toxoplasmosis in cattle milk samples due to the high percentage of cows that showed seropositivity to anti-T. gondii antibodies at the 1:64 blood serum dilution, in whose blood samples there was no such antibody detection. On the other hand, IFAT is a feasible test for diagnosing cattle neosporosis, especially when cut-off point is a serum antibody titer ≥100. It can be recommended as part of herd health programs and epidemiologic studies due to sampling practicality
IFAT; serology; dairy cattle; neosporosis; toxoplasmosis
INTRODUÇÃO:
Toxoplasma gondii e Neospora caninum são parasitos
intracelulares obrigatórios e podem acometer diversas espécies relevantes na produção de
leite e seus derivados, como ovinos, caprinos, bovinos e bubalinos (DAGUER et al., 2004DAGUER, H. et al. Soroprevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii
em bovinos e funcionários de matadouros da microrregião de Pato Branco, Paraná,
Brasil. Ciência Rural, v.34, n.4, p.1133-1137, 2004. Disponível em:
<http://www.scielo.br/pdf/cr/v34n4/a26v34n4.pdf>. Acesso em: 16 fev.
2013.
http://www.scielo.br/pdf/cr/v34n4/a26v34...
; DUBEY & SCHARES, 2011DUBEY J.P.; SCHARES G. Neosporosis in animals: the last five years.
Veterinary Parasitology, v.180, n.1-2, p.90-108, 2011. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304401711003840>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi: 10.1016/j.vetpar.2011.05.03.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
). Ambos parasitas são importantes causas de
problemas reprodutivos, isolados ou associados a outros agentes (DUBEY, SCHARES & ORTEGA-MORA, 2007DUBEY J.P.; SCHARES G. Neosporosis in animals: the last five years.
Veterinary Parasitology, v.180, n.1-2, p.90-108, 2011. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304401711003840>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi: 10.1016/j.vetpar.2011.05.03.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
). O impacto econômico
global da neosporose bovina foi avaliado recentemente e o aborto é o principal fator de
prejuízo ao produtor. Em 10 países avaliados, as perdas econômicas devido ao N.
caninum na bovinocultura excedem um bilhão de dólares anuais (REICHEL et al., 2012REICHEL, M.P. et al. What is the global economic impact of Neospora
caninum in cattle - the billion dollar question. International Journal for
Parasitology, v.43, n.2, p.133-142, 2012. Disponível em:
<http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23246675>. Acesso em: 26 out. 2013. doi:
10.1016/j.ijpara.2012.10.022.
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/23246...
). No Brasil, infecções por
T. gondii trazem prejuízos tanto para a saúde pública quanto para o
setor agropecuário. Há relatos de infecção por T. gondii em diversas
espécies animais, inclusive aquelas que são utilizadas para consumo humano, podendo
causar a toxoplasmose humana (DAGUER et al.,
2004DAGUER, H. et al. Soroprevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii
em bovinos e funcionários de matadouros da microrregião de Pato Branco, Paraná,
Brasil. Ciência Rural, v.34, n.4, p.1133-1137, 2004. Disponível em:
<http://www.scielo.br/pdf/cr/v34n4/a26v34n4.pdf>. Acesso em: 16 fev.
2013.
http://www.scielo.br/pdf/cr/v34n4/a26v34...
; COSTA et al., 2009COSTA, G.H.N. et al. Frequência de anticorpos anti-Neospora caninum e
anti-Toxoplasma gondii em soros de bovinos pertencentes aos estados de São Paulo e de
Minas Gerais. Semina: Ciências Agrárias, v.22, n.1, p.61-66, 2009. Disponível em:
<http://www.uel.br/revistas/uel/index.php/semagrarias/article/viewArticle/1992>.
Acesso em: 12 jan. 2014. doi: 10.5433/1679-0359.2001v22n1p61.
http://www.uel.br/revistas/uel/index.php...
).
O diagnóstico da neosporose e toxoplasmose bovinas pode ser realizado pela detecção do
parasita por histopatologia, imunohistoquímica ou por PCR, ou pela detecção de
anticorpos contra o parasita por ensaio imunoenzimático (ELISA), soroaglutinação ou
reação de imunofluorescência indireta (RIFI), sendo a RIFI considerada uma técnica
específica e de referência para ambos os parasitas (REMINGTON et al., 2004REMINGTON, S. et al. Recent developments for diagnosis of toxoplasmosis.
Journal of Clinical Microbiology, v.42, n.3, p.941-945, 2004. Disponível em:
<http://jcm.asm.org/content/42/3/941.full>. Acesso em: 16 fev. 2014. doi:
10.1128/JCM.42.3.941-945.2004.
http://jcm.asm.org/content/42/3/941.full...
; DUBEY &
SCHARES, 2011DUBEY J.P.; SCHARES G. Neosporosis in animals: the last five years.
Veterinary Parasitology, v.180, n.1-2, p.90-108, 2011. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304401711003840>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi: 10.1016/j.vetpar.2011.05.03.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
). A pesquisa de anticorpos em amostras de leite é um método
utilizado na Europa para investigação, monitoramento e controle de doenças infecciosas
em rebanhos bovinos. O estado sanitário do rebanho pode ser avaliado no leite em relação
à brucelose, diarreia viral bovina (BVD) e Leptospira hardjo (MILNE et al., 2006MILNE, E. et al. Associations between Neospora caninum specific
antibodies in serum and milk in two dairy herds in Scotland. Preventive Veterinary
Medicine, v.77, p.31-47, 2006. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167587706001413>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi: 10.1016/j.prevetmed.2006.06.001.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
). A detecção de anticorpos
anti-
N. caninum em amostras individuais de leite, pela técnica de ELISA,
tem sido utilizada em alguns países desde 1999 (CHANLUN et al., 2006CHANLUN, A. et al. Application of repeated bulk milk testing for
identification of infection dynamics of Neospora caninum in Thai dairy herds.
Veterinary Parasitology, v.136, p.243-250, 2006. Disponível em
<http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6TD7-4J022WT-3>.
Acesso em: 17 fev. 2010. doi:10.1016/j.vetpar.2005.11.025.
http://www.sciencedirect.com/science?_ob...
; MILNE et al.,
2006MILNE, E. et al. Associations between Neospora caninum specific
antibodies in serum and milk in two dairy herds in Scotland. Preventive Veterinary
Medicine, v.77, p.31-47, 2006. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167587706001413>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi: 10.1016/j.prevetmed.2006.06.001.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
; GONZÁLEZ-WARLETA et al., 2011GONZÁLEZ-WARLETA, M. et al. Anti-Neospora caninum antibodies in milk in
relation to production losses in dairy cattle. Preventive Veterinary Medicine, v.101,
n.58-64, 2011. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167587711001474>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi:10.1016/j.prevetmed.2011.04.019.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
).
Por outro lado, a RIFI, embora seja considerada um teste padrão para diagnóstico
sorológico de Neospora spp., é pouco estudado para detecção de anticorpos
anti-
N. caninum no leite (OOI et
al., 2000OOI, H.K. et al. Serological survey and first finding of Neospora
caninum in Taiwan, and the detection of its antibodies in various body fluids of
cattle. Veterinary Parasitology, v.90, n.1, p.47-55, 2000. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304401700002119>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi: 10.1016/S0304-4017(00)00211-9.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
; CAMILLO et al.,
2010CAMILLO, G. et al. Anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos de leite
do sudoeste do Paraná. Arquivos Brasileiros de Medicina Veterinária e Zootecnia,
v.62, p.1511-1513, 2010. Disponível em:
<http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S0102-09352010000600033&script=sci_abstract&tlng=pt>.
Acesso em: 17 fev. 2013.
http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S010...
).
No Brasil, há estudos avaliando a concordância entre a detecção de anticorpos
anti-N. caninum, em amostras de soro sanguíneo e do leite individual de
fêmeas bovinas, somente no Rio Grande do Sul (CAMILLO et
al., 2011CAMILLO, G. et al. Detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em
amostras individuais e coletivas de leite de bovinos pela reação de
imunofluorescência indireta (RIFI). Pesquisa Veterinária Brasileira, v.31, p.482-486,
2011. Disponível em:
<http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-2011_16-21Vet%20976_2161%20LD.pdf>.
Acesso em: 27 jan. 2013. doi: 10.1590/S0100-736X2011000600004.
http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-...
). Em toxoplasmose, os relatos de detecção de anticorpos no leite são
limitados, sendo relatados em ratas, cabras e ovelhas (VITOR et al., 1991VITOR, R.W.A. et al. Eliminação de Toxoplasma gondii através de urina,
saliva e leite de caprinos experimentalmente infectados. Arquivos Brasileiros de
Medicina Veterinária e Zootecnia, v.43, n.2, p.147-154, 1991.; COSTA & LANGONI,
2010COSTA, V.M.; LANGONI, H. Detection of Toxoplasma gondii in the milk of
experimentally infected Wistar female rats. Journal of Venomous Animals and Toxins
including Tropical Diseases, v.16, n.2, p.368-374, 2010. Disponível em:
<http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S167891992010000200016&script=sci_arttext&tlng=es>.
Acesso em: 16 fev. 2013. doi: 10.1590/S1678-91992010000200016.
http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S167...
). Em bovinos, no Brasil, não existem estudos que associem a ocorrência de
anticorpos no soro sanguíneo e no leite para T. gondii. Os testes para
detectar anticorpos anti-T. gondii e N. caninum no leite
poderiam ser mais utilizados, porém, as informações a respeito do método da RIFI para
este tipo de análise em bovinos são limitadas até o presente (COSTA & LANGONI, 2010COSTA, V.M.; LANGONI, H. Detection of Toxoplasma gondii in the milk of
experimentally infected Wistar female rats. Journal of Venomous Animals and Toxins
including Tropical Diseases, v.16, n.2, p.368-374, 2010. Disponível em:
<http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S167891992010000200016&script=sci_arttext&tlng=es>.
Acesso em: 16 fev. 2013. doi: 10.1590/S1678-91992010000200016.
http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S167...
; CAMILLO et al., 2011CAMILLO, G. et al. Detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em
amostras individuais e coletivas de leite de bovinos pela reação de
imunofluorescência indireta (RIFI). Pesquisa Veterinária Brasileira, v.31, p.482-486,
2011. Disponível em:
<http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-2011_16-21Vet%20976_2161%20LD.pdf>.
Acesso em: 27 jan. 2013. doi: 10.1590/S0100-736X2011000600004.
http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-...
). O objetivo deste estudo foi avaliar a aplicabilidade
da pesquisa de anticorpos anti-Toxoplasma gondii e anti-Neospora
caninum em amostras de leite bovino pela reação de imunofluorescência indireta
(RIFI) e sua concordância com a detecção desses anticorpos em amostras de soro
sanguíneo, simultaneamente coletadas das mesmas vacas.
MATERIAL E MÉTODOS:
No presente estudo, foram coletadas 177 amostras simultâneas de sangue e de leite de
vacas em fase inicial de lactação, procedentes de 10 propriedades rurais, localizadas
nas mesorregiões Centro-Sul (três), Oeste (cinco) e Sudoeste (duas) do estado do Paraná.
As amostras de sangue foram coletadas por punção da veia coccígea e centrifugadas a
1000xg por 10min para obtenção do soro sanguíneo. As amostras de soro foram mantidas a
-20°C até as análises. As amostras de leite foram coletadas de maneira asséptica, em
tubos de ensaio estéreis e obtidas de quartos sem mastite clínica. Os três primeiros
jatos de leite foram desprezados e as amostras foram mantidas refrigeradas para
transporte até o laboratório. O leite foi centrifugado a 1000xg durante 20 minutos; a
amostra para análise foi aspirada abaixo da camada de gordura e mantida a -20°C até as
análises (OOI et al., 2000OOI, H.K. et al. Serological survey and first finding of Neospora
caninum in Taiwan, and the detection of its antibodies in various body fluids of
cattle. Veterinary Parasitology, v.90, n.1, p.47-55, 2000. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304401700002119>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi: 10.1016/S0304-4017(00)00211-9.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
;
CAMILLO et al., 2011CAMILLO, G. et al. Detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em
amostras individuais e coletivas de leite de bovinos pela reação de
imunofluorescência indireta (RIFI). Pesquisa Veterinária Brasileira, v.31, p.482-486,
2011. Disponível em:
<http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-2011_16-21Vet%20976_2161%20LD.pdf>.
Acesso em: 27 jan. 2013. doi: 10.1590/S0100-736X2011000600004.
http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-...
).
Cada amostra de soro sanguíneo foi dividida em duas alíquotas nas diluições iniciais de
1:64 e 1:50 (PBS, pH7,2), destinadas para a RIFI contra T. gondii ou
N. caninum, respectivamente; as amostras de leite foram destinadas a
RIFI sem serem diluídas. As amostras de soro sanguíneo que apresentaram reações
positivas foram diluídas até a determinação do título máximo da reação (CAMILO et al., 2011CAMILLO, G. et al. Detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em
amostras individuais e coletivas de leite de bovinos pela reação de
imunofluorescência indireta (RIFI). Pesquisa Veterinária Brasileira, v.31, p.482-486,
2011. Disponível em:
<http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-2011_16-21Vet%20976_2161%20LD.pdf>.
Acesso em: 27 jan. 2013. doi: 10.1590/S0100-736X2011000600004.
http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-...
; MACEDO et al., 2012MACEDO, M.F.S.B. et al. Serum occurrence of anti-Toxoplasma gondii
antibodies in dairy cows slaughtered in an abattoir for human consume. Ciência Rural,
v.42, n.6, p.1065-1069, 2012. Disponível em:
<http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0103-84782012000600019&lng=pt&nrm=iso>.
Acesso em: 16 fev. 2013. doi: 10.1590/S0103-8478201200060001.
http://www.scielo.br/scielo.php?script=s...
). Foram utilizadas lâminas contendo taquizoítos de
T. gondii (cepa RH) ou N.
caninum (cepa NC-1), obtidos através de cultura in vitro
em células VERO, produzidos no Laboratório de Patologia Clínica da UFPR. Os taquizoítos
foram diluídos para uma concentração de 500 a 1000 taquizoítos µl-1 de PBS e
colocados em lâminas forradas com teflon, contendo 12 poços de 5mm de diâmetro cada, as
quais foram secas em estufa a 37°C e conservadas a -20°C até as análises. Amostras de
soro sanguíneo de bovinos, positivas ou negativas, foram utilizadas como controle para a
RIFI em todas as lâminas, assim como anticorpo secundário anti-IgG(c)a bovino
conjugado ao isotiocianato de fluoresceína na diluição de 1:100. As amostras com
fluorescência periférica total do taquizoíto foram consideradas positivas (PARÉ et al., 1995PARÉ, J. et al. Interpretation of an indirect fluorescent antibody test
for diagnosis of Neospora sp. infection in cattle. Journal of Veterinary Diagnostic
Investigation, v.7, p.273-275, 1995.).
As amostras de soro sanguíneo e de leite foram testadas paralelamente. Os resultados da
detecção de anticorpos nos diferentes fluidos testados foram comparados, utilizando-se o
resultado da RIFI no soro sanguíneo como referência. Foram calculados os valores de
sensibilidade, especificidade e concordância (índice kappa) seguindo as
recomendações da OPAS (1997)OPAS (ORGANIZAÇÃO PAN-AMERICANA DA SAÚDE). Métodos de investigação
epidemiológica em doenças transmissíveis. Brasília, 1997. v.1. 116p. Disponível em:
<http://posstrictosensu.iptsp.ufg.br/uploads/59/original_MetodosdeInvestigacaoEpidemiologica-SegundaEd.pdf>.
Acesso em: 16 fev. 2013.
http://posstrictosensu.iptsp.ufg.br/uplo...
. A sensibilidade e a
especificidade da detecção de anticorpos pela RIFI no leite foram calculadas em
comparação à detecção de anticorpos nas amostras de soro sanguíneo.
RESULTADOS E DISCUSSÃO:
Os resultados de concordância entre o título de anticorpos no sangue e no leite, pelo índice kappa para T. gondii e N. caninum, estão apresentados nas tabelas 1 e 2, respectivamente. Nas vacas que apresentaram título de anticorpos anti-T. gondii de 1:64 no soro sanguíneo, foi encontrada boa concordância (índice kappa 0,62), com sensibilidade de 51,3% e especificidade de 100% nas amostras de leite correspondentes. Nas amostras de soro sanguíneo, com título de anticorpos de 256 e 1024, obteve-se sensibilidade e especificidade de 100% e concordância excelente.
O total de vacas positivas para anticorpos contra T. gondii no soro
sanguíneo diluído a 1:64 foi de 37, porém, 19 dessas vacas não tiveram anticorpos
anti-T. gondii detectados no leite. O índice kappa demonstrou
concordância boa e sensibilidade considerada baixa para a detecção comparativa de
anticorpos contra T. gondii no soro sanguíneo e no leite nesta diluição.
Estes resultados depõem contra a segurança do diagnóstico sorológico para T.
gondii em amostras de leite bovino pela RIFI. Considerando que, em geral,
preconizam-se diluições sorológicas com ponto de corte ≥64 (MARANA et al., 1994MARANA, E.R.M. et al. Ocorrência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii em
bovinos de corte, abatidos em matadouros do norte do Paraná - Brasil. Semina:
Ciências Agrárias, v.15, n.1, p.38-40, 1994. ; GARCIA et al.,
1999GARCIA, J.L. et al. Soroprevalência do Toxoplasma gondii em suínos,
bovinos, ovinos e equinos e sua correlação com humanos, felinos e caninos, oriundos
de propriedades rurais do norte do Paraná, Brasil. Ciência Rural, v.29, n.1, p.91-97,
1999. Disponível em:
<http://www.scientificcircle.com/pt/96531/soroprevalencia-toxoplasma-gondii-suinos-bovinosovinos/>.
Acesso em: 16 fev. 2013. doi: 10.1590/S0103-84781999000100017.
http://www.scientificcircle.com/pt/96531...
; DAGUER et al., 2004DAGUER, H. et al. Soroprevalência de anticorpos anti-Toxoplasma gondii
em bovinos e funcionários de matadouros da microrregião de Pato Branco, Paraná,
Brasil. Ciência Rural, v.34, n.4, p.1133-1137, 2004. Disponível em:
<http://www.scielo.br/pdf/cr/v34n4/a26v34n4.pdf>. Acesso em: 16 fev.
2013.
http://www.scielo.br/pdf/cr/v34n4/a26v34...
), estes
resultados discordantes são particularmente relevantes do ponto de vista diagnóstico,
uma vez que 51,35% das vacas soropositivas para anticorpos contra T.
gondii, na diluição de 1:64 do soro sanguíneo, seriam consideradas negativas pela
RIFI, utilizando amostras de leite, incorrendo-se em resultados falso-negativos quanto
ao status sorológicos destes animais.
A utilização da RIFI para detecção de anticorpos contra o T. gondii no
leite bovino e sua relação comparativa com amostras de soro sanguíneo são temas ainda
pouco explorados em bovinos. Analisando os resultados das amostras de soro sanguíneo e
de leite para o T. gondii, observou-se que a frequência de animais com
anticorpos detectáveis no leite aumenta conforme o título no soro, possivelmente devido
aos níveis de imunoglobulinas no leite serem influenciados pelo nível de anticorpos
presentes no soro sanguíneo (HURLEY & THEIL,
2011HURLEY, W.L.; THEIL, P.K. Perspectives on immunoglobulins in colostrum
and milk. Nutrients, v.3, n.4, p.442-474, 2011. Disponível em:
<http://www.mdpi.com/2072-6643/3/4/442>. Acesso em: 16 fev. 2013. doi:
10.3390/nu3040442.
http://www.mdpi.com/2072-6643/3/4/442...
).
As imunoglobulinas no leite são influenciadas pelos níveis de anticorpos no soro, mas
também são produzidas no úbere, antes do parto, e o nível de IgG diminui rapidamente
durante as duas primeiras semanas de lactação (CHANLUN
et al. 2006CHANLUN, A. et al. Application of repeated bulk milk testing for
identification of infection dynamics of Neospora caninum in Thai dairy herds.
Veterinary Parasitology, v.136, p.243-250, 2006. Disponível em
<http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6TD7-4J022WT-3>.
Acesso em: 17 fev. 2010. doi:10.1016/j.vetpar.2005.11.025.
http://www.sciencedirect.com/science?_ob...
; HURLEY & THEIL,
2011HURLEY, W.L.; THEIL, P.K. Perspectives on immunoglobulins in colostrum
and milk. Nutrients, v.3, n.4, p.442-474, 2011. Disponível em:
<http://www.mdpi.com/2072-6643/3/4/442>. Acesso em: 16 fev. 2013. doi:
10.3390/nu3040442.
http://www.mdpi.com/2072-6643/3/4/442...
). Outros fatores que podem alterar o título de anticorpos no leite são: a
fase da lactação; alta produção leiteira diária; ocorrência de inflamação da glândula
mamária; número de lactações; e o estresse (CHANLUN et
al., 2006CHANLUN, A. et al. Application of repeated bulk milk testing for
identification of infection dynamics of Neospora caninum in Thai dairy herds.
Veterinary Parasitology, v.136, p.243-250, 2006. Disponível em
<http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6TD7-4J022WT-3>.
Acesso em: 17 fev. 2010. doi:10.1016/j.vetpar.2005.11.025.
http://www.sciencedirect.com/science?_ob...
). No presente estudo, todas as amostras reagentes no leite foram
provenientes de animais soro reagentes e o leite foi coletado de quartos que não
apresentavam mastite clínica, o que indica possivelmente a ausência de reações
falso-positivas no leite, que, de acordo com KLINTEVALL e colaboradores (1991), poderiam
ser causadas por mastite ou resíduos de gordura. Neste caso, a necessidade de
identificar quartos mamários sem indícios de mastite, para detecção de anticorpos pode
ser um fator complicador para utilização do diagnóstico desses agentes a partir de
amostras de leite, limitando a utilização do teste em animais com alterações
inflamatórias da glândula mamária.
Foram detectados anticorpos contra N. caninum no soro sanguíneo diluído a
1:50 em 83/177 (46,9%) vacas. Destas 83 vacas soropositivas, 67 (80,7%) foram positivas
também para amostras de leite, com concordância considerada excelente (kappa=0,82),
sensibilidade de 80,7% e especificidade de 100%. Os resultados obtidos foram superiores
aos de CAMILLO et al. (2011)CAMILLO, G. et al. Detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em
amostras individuais e coletivas de leite de bovinos pela reação de
imunofluorescência indireta (RIFI). Pesquisa Veterinária Brasileira, v.31, p.482-486,
2011. Disponível em:
<http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-2011_16-21Vet%20976_2161%20LD.pdf>.
Acesso em: 27 jan. 2013. doi: 10.1590/S0100-736X2011000600004.
http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-...
, que, em estudo
similar, obtiveram concordância de 0,40 no mesmo título. De acordo com CHRISTENSEN & GARDNER (2000)CHRISTENSEN, J.; GARDNER, I.A. Herd-level interpretation of test results
for epidemiologic studies of animal diseases. Preventive Veterinary Medicine, v.45,
n.1, p.83-106, 2000. e CHANLUN et al. (2006)CHANLUN, A. et al. Application of repeated bulk milk testing for
identification of infection dynamics of Neospora caninum in Thai dairy herds.
Veterinary Parasitology, v.136, p.243-250, 2006. Disponível em
<http://www.sciencedirect.com/science?_ob=ArticleURL&_udi=B6TD7-4J022WT-3>.
Acesso em: 17 fev. 2010. doi:10.1016/j.vetpar.2005.11.025.
http://www.sciencedirect.com/science?_ob...
, esta diferença entre
concordâncias poderia ser justificada pelos contrastes de ecossistemas entre as regiões
estudadas, o estádio de lactação, a amostragem ou a produção de leite diária, o que pode
interferir no título de anticorpos contra N. caninum no leite.
Por sua vez, quando consideradas as amostras de soro sanguíneo com título de anticorpos
≥100, obteve-se concordância excelente, sensibilidade e especificidade de 100% em
relação às amostras de leite. Esses valores corroboram aqueles obtidos por OOI et al. (2000)OOI, H.K. et al. Serological survey and first finding of Neospora
caninum in Taiwan, and the detection of its antibodies in various body fluids of
cattle. Veterinary Parasitology, v.90, n.1, p.47-55, 2000. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304401700002119>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi: 10.1016/S0304-4017(00)00211-9.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
, que utilizaram amostras de leite
de vacas com título de anticorpos de 1:200 no soro sanguíneo e obtiveram concordância
excelente para a RIFI no leite e no soro sanguíneo. Também confirmam os de CAMILLO et al. (2011)CAMILLO, G. et al. Detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em
amostras individuais e coletivas de leite de bovinos pela reação de
imunofluorescência indireta (RIFI). Pesquisa Veterinária Brasileira, v.31, p.482-486,
2011. Disponível em:
<http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-2011_16-21Vet%20976_2161%20LD.pdf>.
Acesso em: 27 jan. 2013. doi: 10.1590/S0100-736X2011000600004.
http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-...
, que demonstraram 100% de
concordância entre a RIFI, no soro e no leite, para os animais com títulos de anticorpos
séricos ≥100.
Todas as amostras avaliadas para N. caninum que foram positivas no soro
sanguíneo e negativas no leite (16/83; 19,3%) tinham titulação sérica de 50 (k=0,82). A
diluição de 1:50 no soro sanguíneo é utilizada como ponto de corte para diagnóstico de
neosporose por vários autores (DUBEY et al.,
2011DUBEY, J.P. et al. Epidemiology and control of neosporosis and Neospora
caninum. Clinical Microbiology Reviews, v.20, n.2, p.323-367, 2007. Disponível em:
<http://cmr.asm.org/content/20/2/323.full>. Acesso em: 02 out. 2013. doi:
10.1128/CMR.00031-06.
http://cmr.asm.org/content/20/2/323.full...
). Outros estudos realizados, que utilizaram a RIFI para detecção de
anticorpos no leite, comparativamente ao soro sanguíneo (OOI et al., 2000OOI, H.K. et al. Serological survey and first finding of Neospora
caninum in Taiwan, and the detection of its antibodies in various body fluids of
cattle. Veterinary Parasitology, v.90, n.1, p.47-55, 2000. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0304401700002119>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi: 10.1016/S0304-4017(00)00211-9.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
; CAMILLO et al.,
2011CAMILLO, G. et al. Detecção de anticorpos anti-Neospora caninum em
amostras individuais e coletivas de leite de bovinos pela reação de
imunofluorescência indireta (RIFI). Pesquisa Veterinária Brasileira, v.31, p.482-486,
2011. Disponível em:
<http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-2011_16-21Vet%20976_2161%20LD.pdf>.
Acesso em: 27 jan. 2013. doi: 10.1590/S0100-736X2011000600004.
http://www.pvb.com.br/pdf_artigos/23-06-...
), também verificaram concordância de 100% entre soro sanguíneo e leite
somente em vacas com título de anticorpos séricos ≥100, o que indica que o diagnóstico
de neosporose pela RIFI no leite pode ser utilizado, mas com restrições, principalmente
em vacas com títulos séricos de 50. No método de ELISA, para diagnóstico de neosporose
no leite, GONZÁLEZ-WARLETA et al. (2011)GONZÁLEZ-WARLETA, M. et al. Anti-Neospora caninum antibodies in milk in
relation to production losses in dairy cattle. Preventive Veterinary Medicine, v.101,
n.58-64, 2011. Disponível em:
<http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0167587711001474>. Acesso
em: 16 fev. 2013. doi:10.1016/j.prevetmed.2011.04.019.
http://www.sciencedirect.com/science/art...
encontraram resultados de concordância no leite e soro sanguíneo de 97,6%. Da mesma
forma, SCHARES e colaboradores (2005), analisando a adaptação de um ELISA comercial para
testar amostras de soro de sangue e de leite, observaram uma excelente concordância
entre os resultados das amostras pareadas. Estes resultados, aliados aos do presente
estudo, demonstram a viabilidade da pesquisa de anticorpos anti-N. caninum
em amostras individuais de leite, como alternativa para o diagnóstico de
neosporose em rebanhos leiteiros.
CONCLUSÃO:
Nas condições do presente estudo, demonstrou-se que a RIFI não é indicada para diagnóstico da toxoplasmose em amostras de leite bovino, devido ao alto percentual de vacas soropositivas para anticorpos anti-T. gondii no soro sanguíneo diluído 1:64, em cujas amostras de leite não houve detecção desses anticorpos. Por outro lado, a RIFI é um teste viável para o diagnóstico da neosporose bovina, especialmente considerando como ponto de corte um título de anticorpos séricos ≥100, podendo ser recomendável pela praticidade de coleta da amostra como parte de programas de saúde dos rebanhos e estudos epidemiológicos.
AGRADECIMENTO
Ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) Edital Universal - Edital MCT/CNPq n. 014/2011- pelo apoio financeiro.
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Datas de Publicação
-
Publicação nesta coleção
Dez 2014
Histórico
-
Recebido
08 Dez 2013 -
Aceito
28 Maio 2014