Tempo de aquecimento do leite e a contagem de células somáticas e porcentagens de gordura e proteína

Milk heating time and somatic cell count and fat and protein percentages

Resumos

The effect of the heating time on somatic cell count (SCC), fat and protein in milk samples was evaluated in a completely randomized block experiment with 10 blocks with 9 replicates). Treatments used a double boiler heated to 40ºC for: 10 (control), 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, and 90 minutes. Milk samples were analysed using the fluxometric cytometry (CCS) and infrared absorbance (fat and protein percentage) equipments. Results are discussed using analysis of variance, F test and regression analysis. There were no effects of the heating time for CCS and protein percentage. Analisys of variance indicated a heating time effect on fat percentage, however the regression analysis indicated no suitable regression. It was concluded that the heating time in a double boiler at 40ºC does not affect CCS and fat and protein milk percentages, which allows a longer period of laboratory handling.

somatic cell; fat; protein; heating time; milk

NOTA

TEMPO DE AQUECIMENTO DO LEITE E A CONTAGEM DE CÉLULAS SOMÁTICAS E PORCENTAGENS DE GORDURA E PROTEÍNA

Alfredo Ribeiro Pereira¹*; Cristiane Antonia de Oliveira²; Paulo Fernando Machado²; Gabriel Adrián Sarriés³

¹Pós-Graduando do Depto. de Produção Animal - ESALQ/USP.

²Depto. de Produção Animal - ESALQ/USP, C.P. 9 - CEP: 13418-900 - Piracicaba, SP.

³Depto. de Ciências Exatas - ESALQ/USP.

*e-mail: [e-mail]

RESUMO: Com o objetivo de se determinar o efeito do tempo de aquecimento de amostras de leite sobre sua contagem de células somáticas (CCS), porcentagens de gordura e proteína foi realizado um experimento com delineamento em blocos casualizados (10 blocos com 9 parcelas). Os tratamentos foram aquecimento em banho-maria a 40 ^OC nos tempos de 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, e 90 minutos. As amostras de leite foram analisadas nos equipamentos Somacount 300 (CCS) e Bentley 2000 (% de gordura e proteína). Os resultados obtidos foram analisados através de análise de variância, teste F e análise de regressão. A CCS e a % de proteína não sofreram alteração pelo tempo de aquecimento. A análise de variância da % de gordura detectou efeito do tempo de aquecimento, mas a análise de regressão não indicou nenhuma regressão possível, sendo que esta variação provavelmente foi ao acaso. Os dados permitem concluir que o tempo de aquecimento em banho-maria a 40^OC não é um fator que afete a CCS ou as porcentagens de gordura e proteína do leite, viabilizando maior período de manipulação laboratorial das amostras.

Palavras-chave: células somáticas, gordura, proteína, tempo de aquecimento, leite

Milk heating time and somatic cell count and and fat and protein percentagens

ABSTRACT: The effect of the heating time on somatic cell count (SCC), fat and protein in milk samples was evaluated in a completely randomized block experiment with 10 blocks with 9 replicates). Treatments used a double boiler heated to 40^oC for: 10 (control), 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, and 90 minutes. Milk samples were analysed using the fluxometric cytometry (CCS) and infrared absorbance (fat and protein percentage) equipments. Results are discussed using analysis of variance, F test and regression analysis. There were no effects of the heating time for CCS and protein percentage. Analisys of variance indicated a heating time effect on fat percentage, however the regression analysis indicated no suitable regression. It was concluded that the heating time in a double boiler at 40^oC does not affect CCS and fat and protein milk percentages, which allows a longer period of laboratory handling.

Key words: somatic cell, fat, protein, heating time, milk

INTRODUÇÃO

A introdução de analisadores automáticos de leite tem permitido o desenvolvimento de laboratórios centrais para análise de leite, visando melhorar o manejo do rebanho e viabilizar sistemas de pagamento do leite por qualidade, com a vantagem, em muitos casos, de ter maior rapidez e acurácia na análise dos componentes do leite (Monardes et al. 1996).

Devido a destinação que se dará aos resultados das análise é muito importante que a colheita, o acondicionamento e transporte das amostras até o laboratório, o preparo para análise e a análise propriamente dita sejam corretamente conduzidos para que se obtenha dados confiáveis.

A operação que toma mais tempo durante o manipulação laboratorial é o aquecimento das amostras que é realizado em banho maria a 40^oC por 10 minutos. Geralmente durante o aquecimento das amostras o laboratorista executa alguma outra tarefa, inclusive operação da máquina de análise de leite, com o objetivo de melhor utilizar seu tempo, mas muitas vezes ele não consegue finalizar a tarefa antes do termino do tempo de aquecimento, assim as amostras são aquecidas por mais tempo que o padrão.

O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito do tempo de aquecimento de amostras de leite em banho-maria sobre suas porcentagens de gordura e proteína e sua contagem de células somáticas (CCS).

MATERIAL E MÉTODOS

Foram colhidas amostras de leite de 10 vacas que não apresentavam sinais clínicos de mastite. As amostras foram então cuidadosamente homogeneizadas e divididas em 9 subamostras com 60 ml de leite, perfazendo-se um total de 90 amostras de leite.

O delineamento experimental utilizado foi de blocos casualizados. Assim o leite de cada vaca representou um bloco, e cada subamostra uma parcela.

O modelo matemático utilizado foi y_ij = m + t_i + b_j + e_ij ,

onde: y_ij é a contagem de células somáticas obtida no bloco (leite) j, pelo efeito do tratamento (tempo de aquecimento) i, sob a ação da variação ao acaso e_ij associada a esta amostra;

m é uma constante;

t_i é o efeito do tratamento i (tempo de aquecimento) da amostra;

b_j é o efeito do bloco j, isto é do leite de cada vaca;

e_ij é a variação do acaso associada a amostra ij.

As noventa amostras foram aquecidas em banho maria a 40^oC (Bentley 1995) e a cada 10 minutos foi retirada do banho uma parcela de cada bloco para serem analisadas para contagem de células somáticas, porcentagens de gordura e proteína.

As análises de gordura e proteína foram executadas por absorção infravermelha no equipamento Bentley 2000 (Bentley 1995) e as contagens de células somáticas foram executadas por citometria fluxométrica no equipamento Somacount 300. Este equipamento é baseado na contagem de DNA reagido com corante e iluminado por raio laser (Somacount 1995).

As análises estatísticas foram realizadas no pacote estatístico SAS Institute (1990), utilizando-se do procedimento de modelos lineares gerais (Proc GLM) e o procedimento de regressão (Proc Reg), aplicando-se análise de variância, teste F e análise de regressão.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Contagem de Células Somáticas

Foi realizada análise de variância e foi aplicado o teste F nos dados de contagem de células somáticas como indicado na TABELA 1.

O quadro de análise de variância na TABELA 1 indica que ocorreu o efeito esperado do bloco, mas não houve efeito do tempo de aquecimento (P>0,8512), isto é a probabilidade de erro ao se afirmar que o tempo de aquecimento possui efeito sobre a CCS é de 85% sobre a contagem de células somáticas. A ausência de efeito pode também ser visualizada na figura 1, onde claramente é mostrado pela linha de tendência que é aproximadamente horizontal mostrando nenhuma alteração da CCS ao longo do tempo. Além disso a equação determinada para a CCS em função do tempo de aquecimento apresenta um coeficiente de determinação muito baixo (r²=0,0001, o que significa que apenas um décimo de milésimo da variação da CCS pode ser explicada pelo tempo de aquecimento).

As moléculas de DNA geralmente desnaturam com o aumento de temperatura, normalmente acima de 80 a 90^oC (Lehninger et al. 1995). Assim a temperatura utilizada (40^oC) não foi capaz de provocar alterações no DNA que pudessem interferir na contagem de células somáticas realizada pelo equipamento.

O fato do tempo de aquecimento não ter sido significativo é de grande importância, pois indica que as amostras permanecem confiáveis e podem ser utilizadas na determinação da CCS mesmo que por algum motivo elas permaneçam por mais tempo que o padrão em aquecimento.

Porcentagem de Gordura

Foi realizada análise de variância e foi aplicado o teste F nos dados de porcentagem de gordura como é indicado na TABELA 2.

O quadro de análise de variância na TABELA 2 indica que houve efeito significativo do tempo de aquecimento das amostras sobre a porcentagem de gordura (P<0,0109).

Desse modo foi dado continuidade a análises estatísticas através da utilização da análise de regressão indicada na TABELA 3.

As regressões linear e quadrática, ao serem analisadas mostraram-se não significativas (P>94,15 e P>99,73) como pode ser visto no quadro de análise de regressão da TABELA 3 e 4. A figura 2 também indica a não existência de efeito de tempo de aquecimento de amostras de leite sobre sua porcentagem de gordura através da horizontalidade da reta de tendência e através do coeficiente de determinação (r²=0,00006, significa que 6 centésimos de milésimos da variação da porcentagem de gordura pode ser explicada pela variação do tempo de aquecimento).

O fato de que a análise de variância ter indicado efeito do tempo de aquecimento sobre e a porcentagem de gordura e a análise de regressão não ter sido significativa é explicado pelo fato de que os tempos de aquecimento não diferiram do tempo padrão (10 minutos) com exceção dos tempo de 20 e 70 minutos (teste de Dunnett a 5% de significância, porém quando realizado a 1% deixa de ser significativa as diferenças entre as médias), assim a análise de variância detectou diferença, mas por serem pontos dispersos e distantes levou a análise de regressão a não detectar efeito do tempo de aquecimento sobre as porcentagens de gordura.

Provavelmente a diferença nas porcentagens de gordura do tempo 2 e 7 seja devido a variação ao acaso, ou falha na homogeneização das amostras no momento da análise. Neste ultimo caso a CCS e a porcentagem de proteína não foram afetadas por serem estes componentes mais facilmente homogeneizáveis que a gordura.

Porcentagem de Proteína

Foi realizada análise de variância e foi aplicado o teste F nos dados de porcentagem de proteína como é indicado na TABELA 5.

O quadro de análise de variância na TABELA 5 indica que houve o efeito esperado do bloco e houve uma tendência de efeito do tempo de aquecimento das amostras sobre a porcentagem de proteína, mas esta não foi significativa. Esta ausência de efeito do tempo de aquecimento é também visualizada pela figura 2 através da horizontalidade da reta de tendência da porcentagem de proteína e pelo coeficiente de determinação (r²=0,000005, isto é 5 partes por milhão da variação de proteína pode ser explicada pela variação do tempo de aquecimento.

As proteínas desnaturam quando aquecidas a 40-50^oC (Lehninger 1981), mas a caseína, que representa 80% da proteína do leite, é altamente resistente ao calor sendo necessário 12 horas a 100^OC ou 1 hora a 120^oC para a sua desnaturação (Oliveira & Caruso 1996). Novamente a temperatura utilizada não foi suficientemente alta para provocar alterações nas moléculas que pudessem interferir na determinação eletrônica da porcentagem de proteína.

Como na CCS, o tempo de aquecimento não foi significativo para a porcentagem de proteína, e isto é indicativo que as amostras de leite mesmo tendo sido aquecidas por mais tempo que o normal (até 90 minutos) poderão ser utilizadas na determinação da porcentagem de proteína.

CONCLUSÃO

O aquecimento das amostras de leite por até 90 minutos (a 40^oC) não altera a contagem de células somáticas ou porcentagens de gordura e proteína, possibilitando maior período de manipulação laboratorial das amostras.

Recebido para publicação em 13.05.99

Aceito para publicação em 26.07.99

Referências bibliográficas

• BENTLEY 2000. Operator's manual Chaska: Bentley Instruments, 1995. 77p.
• LEHNINGER, A.L. Biochemistry. 2.ed. New York: Worth Publishers, 1981. 1104p.
• LEHNINGER, A.L.; NELSON, D.L.; COX, M.M. Princípios de bioquímica. 2.ed. Săo Paulo: Savier, 1995. 839p.
• MONARDES, H.G.; MOORE, R.K.; CORRIGAN, B.; RIOUX, Y. Preservation and storage mechanism for raw milk samples for use in milk-recording schemes. Journal of Food Protection, v.59, n.2, p.151-154, 1996.
• OLIVEIRA, A.J. de; CARUSO, J.G.B. Leite: obtençăo e qualidade do produto fluido e derivados. Piracicaba: FEALQ, 1996. 80p.
• SAS Institute. SAS/STAT user's guide: version 6. 4.ed. Cary: Statistical Analysis System Institute, 1990. 1022p.
• SOMACOUNT 300. Operator's manual. Chaska: Bentley Instruments, 1995. 112p.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  22 Dez 2000
• Data do Fascículo
  1999

Histórico

• Aceito
  26 Jul 1999
• Recebido
  13 Maio 1999