Resumo
Fundamento
As doenças associadas ao aparelho circulatório são as principais causas de morbidade e mortalidade em todo o mundo, implicando a necessidade de implantes vasculares. Assim, a produção de biomateriais vasculares tem se mostrado uma alternativa promissora às terapias utilizadas em estudos e pesquisas relacionados à fisiologia vascular.
Objetivos
O presente projeto visa ao desenvolvimento artificial de vasos sanguíneos pela recelularização de scaffolds vasculares derivados de vasos placentários bovinos.
Métodos
A superfície corioalantoide da placenta bovina foi utilizada para produzir biomateriais descelularizados. Para a recelularização, 2,5 x 104 células endoteliais foram semeadas acima de cada fragmento de vaso descelularizado durante três ou sete dias, quando a cultura foi interrompida e os fragmentos foram fixados para análise de adesão celular. Biomateriais descelularizados e recelularizados foram avaliados por histologia básica, microscopia eletrônica de varredura e imuno-histoquímica.
Resultados
o processo de descelularização produziu vasos que mantiveram a estrutura natural e o conteúdo de elastina, e não foram observadas células e gDNA remanescentes. Além disso, células precursoras endoteliais se ligaram ao lúmen e à superfície externa do vaso descelularizado.
Conclusão
nossos resultados mostram a possibilidade de usos futuros desse biomaterial na medicina cardiovascular, como, por exemplo, no desenvolvimento de vasos artificiais.
Matriz Extracelular Descelularizada; Bioengenharia; Vasos Sanguíneos
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Análise de vasos de placenta bovina descelularizada. Hematoxilina eosina, (A1) Vaso nativo, Bar= 20 μm, (^) lúmen: fibras da matriz extracelular coradas em rosa e núcleo celular em roxo; (B1) Descelularizado, Bar= 20 μm, (*) superfície externa: núcleos celulares ausentes; (C-F1) Recelularizado, Bar= 20 μm, (*) superfície externa: (C1), Recelularizado três dias (linha SV), núcleos celulares corados em roxo aderidos à superfície externa do biomaterial; (D1), Recelularizado três dias com células do saco vitelino canino com superexpressão de fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) e proteína verde fluorescente aumentada (eGFP) (linhagem SV-VEGF), fibras da matriz extracelular coradas em rosa e núcleos celulares em roxo aderidos à superfície externa do biomaterial; (E1), Células do saco vitelino caninas recelularizadas com sete dias (linhagem SV), núcleos celulares corados em roxo aderidos à superfície externa do biomaterial; (F1), Recelularizado sete dias com células (linhagem SV-VEGF), fibras da matriz extracelular coradas em rosa, núcleos celulares em roxo aderidos à superfície externa do biomaterial. (A4) bar = 2 μm, descelularizado: Observe a preservação das fibras da matriz extracelular do biomaterial vascular; Recelularização com três dias de cultura (B4, C4): (B4) bar = 30 μm, com células da VS aderidas à parede do biomaterial vascular; (C4) bar = 10 μm, células SV-VEGF aderidas à parede do biomaterial vascular. Ensaio de imuno-histoquímica: expressão de elastina no biomaterial vascular da superfície corioalantoide bovina nativa e recelularizada com células SV-VEGF. Legenda: Bar=20 µm, (A3) Vaso sanguíneo nativo da superfície corioalantoide da placenta bovina, observe a expressão de elastina em toda a parede vascular; (B3) Vaso sanguíneo nativo da superfície corioalantoide da placenta bovina, controle negativo corado com hematoxilina; (C3) Recelularização de 7 dias de biomaterial vascular placentário bovino com células SV-VEGF, observando a expressão de elastina em toda a parede vascular; (D3) Recelularização de 7 dias de biomaterial vascular placentário bovino com células SV-VEGF, controle negativo corado com hematoxilina. Ensaio de recelularização: Barra 20 µm; (A2-C2) 3 dias de cultivo; (A2) Biomaterial vascular controle descelularizado, observe a ausência de núcleos; (B2) Biomaterial recelularizado com células progenitoras endoteliais (SV) do saco vitelino canino, observe núcleos corados em azul por 4’,6’-diamino-2-fenil-indol (DAPI); (C2) Biomaterial recelularizado com células SV-VEGF, observe núcleos corados em azul por DAPI, eGFP não observada; (D2-F2) 7 dias de cultivo; (D2) controle descelularizado de biomaterial vascular, observe a ausência de núcleos; (E2) Biomaterial recelularizado com células SV, observe núcleos corados em azul por DAPI; (F2) Biomaterial recelularizado com células SV-VEGF, observe núcleos corados em azul por DAPI.
