SUSCETIBILIDADE DE AMOSTRAS DE ESCHERICHIA COLI DE ORIGEM AVIÁRIA A ANTIMICROBIANOS

SUSCEPTIBILITY TO ANTIMICROBIAL DRUGS OF ESCHERICHIA COLI STRAINS OF AVIAN ORIGIN

RESUMO

O presente trabalho teve como objetivo verificar a suscetibilidade de cepas de Escherichia coli de origem aviária, a algumas drogas antimicrobianas de uso veterinário e/ou humano. Foram analisadas 120 amostras isoladas de aves comerciais necropsiadas no Laboratório de Descalvado. Foram testadas 10 drogas antimicrobianas. A tetraciclina foi a droga para a qual se verificou maior resistência (76% das amostras resistentes). A droga mais eficiente foi a fosfomicina (91,3% de amostras sensíveis). Apenas 7 amostras foram sensíveis para todas as drogas testadas, 20 apresentaram resistência a uma ou duas drogas, enquanto 93 demonstraram-se multi-resistentes

(resistentes a 3 ou mais antimicrobianos). Nenhuma droga foi eficiente para todas as amostras bacterianas avaliadas.

PALAVRAS-CHAVE:
Escherichia coli; antimicrobianos; aves.

ABSTRACT

The aim of the present work was to verify the susceptibility of Escherichia coli strains from avian origin to some antimicrobial drugs of veterinary and/or human use. One hundred and twenty strains were analyzed, all isolated at the Laboratory of Descalvado from commercial avians. Ten antimicrobial drugs were tested. Seventy-six percent of the strains were resistant to tetracicline. The most efficient drug was fosfomycin. Only 7 strains were sensitive for all the tested drugs, 20 of them presented resistance to 1 or 2 drugs, while 93 strains were demonstrated multidrug-resistant (resistant to 3 or more antimicrobials). No drug was efficient for all the analysed strains.

KEY WORDS:
Escherichia coli; antimicrobials; avians.

INTRODUÇÃO

Escherichia coli é uma bactéria anaeróbia facultativa, pertencente a microbiota normal do trato intestinal de animais e homens (BONTEN et al., 1990). As amostras de E. coli que possuem fatores de virulência como habilidade de adesão, produção de aerobactina, resistência sérica e presença de plasmídeo CoIV, são potencialmente patogênicas para aves (WOOLEY et al., 1998; GONZÁLEZ et al., 1990). O trato respiratório superior das aves é a principal porta de entrada de E. coli patogênica, ocorrendo a colonização e multiplicação do agente na traquéia, com posterior disseminação para os sacos aéreos e tecidos adjacentes (SOJKA, 1961). A infecção por E. coli (colibacilose) é uma das principais doenças da avicultura industrial moderna, devido aos grandes prejuízos econômicos causados no mundo inteiro, por quadros como septicemia, peritonite, pneumonia, aerossaculite, pericardite, onfalite e salpingite, entre outros (FERREIRA & KNOBL, 2000).

São cada vez maiores os índices de resistência das bactérias frente aos antimicrobianos testados (BLANCO et al., 1997), representando um sério problema mundial (COHEN, 2000). Amostras de E. coli isoladas de aves são freqüentemente resistentes para mais de uma droga (GROSS, 1991; FERREIRA & KNOBL, 2000). Isto se deve principalmente ao uso indiscriminado e prolongado, concentrações subterapêuticas e terapias indequadas de antimicrobianos (FERREIRA & KNOBL, 2000) que proporciona uma pressão na seleção de genes de resistência antimicrobiana (TURTURA et al., 1990; QUEDNAU et al., 1998).

O objetivo do presente trabalho foi avaliar a susceptibilidade de amostras de E. coli de origem aviária frente aos antimicrobianos comumente utilizados no setor avícola.

MATERIAIS E MÉTODOS

Aves

Foram necropsiadas aves (pintainhos, frangos de corte, reprodutoras postura comercial) com quadro clínico suspeito de colibacilose.

Colheita do material

A colheita do material dos órgãos (sacos aéreos, ovidutos, fígado e coração) com lesões macroscópicas sugestivas de colibacilose foi realizada assepticamente, utilizando-se pinças, tesouras e suabes esterilizados. O material colhido foi acondicionado em frasco coletor esterilizado e processado imediatamente.

Procedimento bacteriológico

Os suabes e fragmentos de órgãos foram inoculados em caldo BHI (Brain Heart Infusion DIFCO) e incubados a 37º C por 24h. Posteriormente foi semeado em ágar EMB (Eosina Methyleno Blue DIFCO), incubado a 37º C por 24h. As colônias com características típicas de E. coli, foram confirmadas através de série bioquímica, de acordo com BIER (1980). As amostras foram armazenadas em ágar nutriente (DIFCO). Teste de susceptibilidade aos antimicrobianos

A metodologia empregada seguiu o método de difusão em placa descrito por BAUER & KIRBY (1966).

Cada amostra foi semeada e incubada a 37º C por 24hs em caldo Müller Hinton (DIFCO). O plaqueamento foi realizado em ágar EMB e incubado a 37º C por 24h. O inóculo foi preparado transferindo-se 3 a 5 colônias para solução salina tamponada (PBS pH 7,2), resultando em uma suspensão com turvação 0,5 da escala de McFarland. Um suabe foi saturado no caldo inóculo e semeado por toda a superfície do meio ágar Mueller-Hinton em placa de Petri de 14 cm de diâmetro. Os discos foram distribuídos uniformemente sobre a superfície do meio de cultura. As placas foram incubadas a 37º C por 24h. Procedeu-se à leitura a olho nú, utilizando-se régua para medição do diâmetro (mm) do halo de inibição. Os dados obtidos foram comparados com os da tabela padrão, classificando-os como resistente, intermediário e sensível.

Discos de Antimicrobianos

Foram testadas 10 drogas antimicrobianas: ampicilina (AMP 10 mcg), amoxicilina (AMO 10 mcg), enrofloxacina (ENO 5 mcg), norfloxacina (NOR 10 mcg), tetraciclina (TT 30 mcg), trimetoprim + sulfadiazina (TS 5 e 20 mcg), fosfomicina (FOS 200 mcg), cefalotina (CF 30 mcg), cefalexina (CFE 30 mcg), ciprofloxacina (CIP 5 mcg). Todos os discos de antimicrobianos testados eram da marca Cecon.

RESULTADOS

Foram isoladas 120 amostras de E. coli. Os resultados dos antibiogramas estão contidos na Tabela 1. Do total de amostras bacterianas analisadas, apenas 7 foram sensíveis a todos os antimicrobianos testados, 20 demonstraram resistência a uma ou duas drogas e 93 apresentaram resistência para 3 ou mais drogas antimicrobianas.

Tabela 1
Suscetibilidade apresentada por 120 amostras de E. coli aviária frente a antimicrobianos.

Antimicrobianos	Resistência N° (%)	Intermediária N° (%)	Sensível N° (%)
Tetraciclina	91 (76,0)	-	29 (24,0)
Ciprofloxacina	75 (62,5)	-	45 (37,5)
Enrofloxacina	74 (62,0)	-	46 (38,0)
Amoxicilina	70 (58,0)	-	50 (42,0)
Ampicilina	70 (58,0)	-	50 (42,0)
Norfloxacina	69 (57,6)	-	51 (42,4)
Cefalexina	65 (54,6)	6 (5,00)	49 (40,4)
Cefalotina	65 (54.6)	6 (5,00)	49 (40,4)
Sulfadiazina + Trimetoprim	59 (49,5)	-	61 (50,5)
Fosfomicina	10 (8,70)	-	110 (91,3)

DISCUSSÃO

No presente trabalho foi verificado que grande número das amostras de E. coli apresentou resistência frente aos antimicrobianos testados, assim como relataram AL-GHAMDI et al. (1999), LAMBIE et al. (2000) e CARDOSO et al. (2002). Dentre as drogas testadas pelo presente estudo, somente a fosfomicina mostrou-se eficiente para a maioria das amostras analisadas.

BLANCO et al. (1997), AL-GHAMDI et al.(1999) e SCHROEDER et al. (2002) observaram que a tetraciclina foi a droga para a qual detectaram mais resistência, corroborando com os resultados do presente trabalho.

As amostras bacterianas estudadas por AL-GHAMDI et al. (1999) apresentaram mais sensibilidade para ciprofloxacina, enquanto que no presente trabalho ocorreu maior resistência para esta droga (62,5%).

A resistência a enrofloxacina e a norfloxacina apresentou-se em 62% e 57,6% das amostras avaliadas no presente estudo, respectivamente. LAMBIE et al. (2000) relataram índices de resistência significativos a norfloxacina enquanto BLANCO et al. (1997) verificaram resistência em apenas 13% das amostras testadas. FERREIRA & KNOBL (2000) detectaram 98% e 97% de amostras resistentes a danofloxacina e enrofloxacina, respectivamente. Estudando amostras isoladas de perus, SCHROEDER et al. (2002) observaram resistência em 20% delas contra ácido nalidíxico. Esses autores salientaram a importância desse dado, por serem as fluoroquinolonas usadas em tratamentos de infecções por E. coli em humanos. Concluíram que o impacto do uso de drogas como a enrofloxacina na produção avícola e a emergência de bactérias resistentes a quinolonas e a fluoroquinolonas deve continuar a ser monitorada. BLANCO et al. (1997) também recomendaram que o uso dessa classe de drogas em aves deve ser prudente, pois pode ocorrer resistência cruzada com enteropatógenos humanos.

BLANCO et al. (1997) e LAMBIE et al. (2000) evidenciaram maior porcentagem de resistência ao sulfadiazina + trimetoprim do que demonstrado neste estudo (49,5%). Quanto a ampicilina, BLANCO et al. (1999) e SCHROEDER et al. (2002) encontraram menos amostras resistentes (46% e 12%, respectivamente) do que aquelas deste trabalho.

CARDOSO et al. (2002) observaram que porcentagem significativa de amostras de E. coli aviária apresentou resistência a norfloxacina, amoxicilina e sulfadiazina + trimetoprim, corroborando com os dados deste estudo. Porém, os referidos autores relataram alta resistência (70%) a fosfomicina, sendo que o presente estudo detectou sensibilidade em 91,3% das amostras testadas. Provavelmente, a fosfomicina mostrou-se a mais eficiente por ser uma droga de alto custo financeiro, inacessível a muitos produtores de aves. Portanto, trata-se de antimicrobiano pouco utilizado em avicultura, resultando em baixa pressão seletiva de genes de resistência.

Foi relatado que amostras de E. coli de origem aviária, apresentaram mais resistência do que em amostras isoladas de humanos (AL-GHAMDI et al., 1999). Há recentes trabalhos que sugerem que o uso das tetraciclinas, drogas sulfas, cefalosporinas e penicilinas é maior fator de disseminação de E. coli antibióticos-resistentes (GALLAND et al., 2001; VAN DEN BOGAARD et al.,2001). Os resultados do presente trabalho são importantes não apenas para a avicultura como também para a medicina humana, devido aos riscos de transferência de bactérias dos animais para humanos. SCHROEDER et al. (2002) detectaram duas amostras de E. coli isoladas de humanos resistentes a ceftiofur, droga de uso exclusivo em veterinária. Esses pesquisadores concluíram que pode ocorrer transferência de bactérias resistentes entre animais e humanos. Entretanto, SADER (2004) afirmou que não foi documentada ainda ligação entre resistência em hospitais e uso de aditivos antimicrobianos em animais produtores de alimentos. O autor considerou que a resistência é uma ameaça à saúde pública mundial, sendo evidente que as doenças adquiridas em hospitais e na comunidade, não transmitidas por alimentos, são os principais problemas. Porém, o mesmo autor informou que a E. coli é um dos patógenos transmitidos por alimentos que causam preocupação quanto a uma relação entre animais e humanos.

Neste estudo, demonstrou-se que número preocupante de amostras de E. coli aviária encontram-se resistentes a drogas antimicrobianas. Salienta-se que 93 amostras bacterianas demonstraram multirresistência. O tratamento com antimicrobianos é uma das formas de diminuir o impacto da colibacilose (FERREIRA & KNOBL, 2000), mas a emergência e a disseminação de resistência antimicrobiana em amostras de E. coli pode complicar os tratamentos das infecções em humanos e animais (SCHROEDER et al., 2002). Portanto, a realização do teste de susceptibilidade a antimicrobianos deve preceder o tratamento (FERREIRA & KNOBL, 2000). Essa prática deveria tornar-se hábito, evitando-se uso inadequado de medicamentos. Dessa forma, seria diminuída a pressão seletiva de genes de resistência antimicrobiana (QUEDNAU et al., 1998; TURTURA et al., 1990) e seria evitado o desperdício de medicamentos, já que uma das principais limitações do tratamento são os custos da medicação (FERREIRA & KNOBL, 2000).

CONCLUSÃO

A maioria das 120 amostras de E. coli analisadas pelo presente trabalho apresentou resistência a uma ou mais drogas antimicrobianas, sendo 93 delas multiresistentes.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

• AL-GHAMDI, M.S.; EL-MORSY, F.; AL-MUSTAFA, Z.H; AL-RAMADHAN, M.; HANIF, M. Antibiotic resistance of Escherichia coli isolated from poultry workers, patients and chickens in the eastern province of Saudi Arabia. Trop. Med. Intern. Health, v.4, n.4, p.278-283, 1999.
• BAUER, A.W.; KIRBY, W.M..; SHERRIS, J.C.; T URK, M. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disc method. Am. J. Clin. Pathol., v.45, p.493-496, 1966.
• BIER, O. Bacteriologia e imunologia 20.ed. São Paulo: Melhoramentos, 1980. 1062p.
• BLANCO, J.E.; B LANCO, M.; MORA, A.; BLANCO, J. Prevalence of bacterial resistance to quinolones and other antimicrobials among avian Escherichia coli strains isolated from septicemic and healthy chickens in Spain. J. Clin. Microbiol., v.35, p.2184-2185, 1997.
• BONTEN, M.; STOBBERINGH, E.; HOUBEN, A. High prevalence of antibiotic resistant Escherichia coli in faecal samples of students in the south-east of the Netherland. J. Antimicrob. Chemother., v.26, p.585-592, 1990.
• CARDOSO, A.L.S.P.; TESSARI, E.N.C.; CASTRO, A.G.M.; ZANATTA, G.F. Avaliação da susceptibilidade a antimicrobianos de cepas de Escherichia coli de origem aviária. Arq. Inst. Biol, São Paulo, v.69, n.2, p.1-5, 2002.
• COHEN, M.L. Changing patterns of infectious diseases. Nature, v.406, p.762-767, 2000.
• FERREIRA, A.J.P. & KNÖBL, T. Colibacilose Aviária. In: BERCHIERI JUNIOR, A. & MACARI, M. (Eds.). Doenças das aves Campinas: Facta, 2000. p.197-207.
• GALLAND, J.C; HYATT, D.R.; CRUPPER, S.S.; ACHESON, D.W. Prevalence, antibiotic susceptibility, and diversity of Escherichia coli O157:H7 isolates from a longitudinal study of beef cattle feedlots. Appl. Environ. Microbiol., v.67, p.1619-27, 2001.
• GONZÁLEZ, E.A.; BLANCO, J.; BALODA, S.B.; F ORMAN, G.; D HO, M.; LAFONT, J.P.; WADSTRÖM, T. Virulent Escherichia coli strains for chicks bind fibronectin and type II collagen. Microbios, v.62, p.113-127, 1990.
• LAMBIE, N.; GELEKA, M.; BROWN, G.; RYAN, J. Retrospective study on Escherichia coli infection in broilers subjected to postmorten examination and antibiotic resistance of isolates in Trinidad. Avian Dis., v.44, p.155-160, 2000.
• QUEDNAU, M.; AHRNÉ, S.; PETERSSON, A.C.; MOLIN, G. Antibioticresistant strains of Enterococcus isolated from Swedish and Danish related chickens and pork. J. Appl. Microbiol, v.84, p.1163-1170, 1998.
• SADER, H.S. O uso de antimicrobianos promotores de crescimento contribui para a resistência a antibióticos? In: CONFERÊNCIA APINCO DE CIÊNCIA E TECNOLOGIA AVÍCOLAS, 5., 2004, Santos, SP. Anais. Santos: 2004. v.2, p.211-217.
• SCHROEDER, C.M.; M ENG, J.; ZHAO, S.; DEBRO, C.; TORCOLINI, J.; ZHAO, C.; MCDERMOTT, P.F.; WAGNER, D.D.; WALKER, R.D.; WHITE, D.G. Antimicrobial resistance of Escherichia coli O26, O103, 00128, and O145 from animals and humans. Emerg Infect Dis, v.8, n.12, 2002. Disponível em: <http://www.cdc.gov/ndcido/eid/vol.8no12/02-0070.htm>. Acesso em: 21 jul. 2004.
  » http://www.cdc.gov/ndcido/eid/vol.8no12/02-0070.htm
• SOJKA, W.J. & CARUAGHAN, R.B.A. Escherichia coli infection in poultry. Res. Vet. Sci, v.2, p.340-352, 1961.
• TURTURA, G.C.; MASSA, S.; GHAZVINIZADEH, H. Antibiotic resistance among coliform bacteria isolated from carcasses of commercially slaughtered chickens. Int. J. Food Microbiol, v.11, p.351-354, 1990.
• VAND EN BOGAARD A.E.; LONDON N.; DRIESSSEN C.; STOBBERINGH E.E. Antibiotic resistance of faecal Escherichia coli in poultry, poultry farmers and poultry slaughterers. J. Antimicrob. Chemother., v.47, p.763-771, 2001.
• WOOLEY, R.E; GIBBS, P.S.; BROWN, T.P.; GLISSON, J.R.; STEFFENS, W.L.; MAUER, J.L. Colonization of the chickens trachea by an avirulent avian Escherichia coli transformed with plasmid pHK 11. Avian Dis., v.42, p.194-198, 1998.

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  17 Jun 2024
• Data do Fascículo
  Jul-Sep 2004

Histórico

• Recebido
  05 Jul 2004
• Aceito
  28 Jul 2004