COMPARAÇÃO DAS TÉCNICAS DE ISOLAMENTO VIRAL E NESTED PCR NA DETECÇÃO DO BHV-1 EM SÊMEN BOVINO EXPERIMENTALMENTE E NATURALMENTE CONTAMINADO

COMPARISAN OF THE TECHNIQUESS OF VIRAL ISOLATION AND NESTED PCR IN THE DETECTION of BHV-1 IN BOVINE SEMEN CONTAMINATED EXPERIMENTALLY AND NATURALLY

RESUMO

O Herpesvírus Bovino tipo-1 (BHV-1) é o agente etiológico da Rinotraqueíte Infecciosa Bovina (IBR), Vulvovaginite Pustular Infecciosa (IPV) e Balanopostite Pustular Infecciosa (IBP) e o principal patógeno viral encontrado no sêmen bovino. A técnica padrão para o diagnóstico do vírus em amostra de sêmen é o isolamento viral, a qual apresenta uma série de desvantagens. O objetivo deste trabalho foi avaliar uma nested PCR (nPCR) para a detecção do BHV-1 em sêmen bovino. Os primers foram dirigidos para a região codificadora de gB e a especificidade do fragmento amplificado foi confirmada pelo perfil de restrição com as enzimas Fnu4HI e Sau96I. A nPCR avaliada revelou-se rápida e com alta sensibilidade analítica (10⁵ vezes superior ao isolamento viral). Ao ser aplicada à série de amostras de sêmen colhidas de um touro proveniente de central de Inseminação Artificial, positivo ao isolamento viral em uma única das colheitas, a nPCR mostrou ser capaz de detectar a presença do BHV-1 27 dias antes e 3 dias após o isolamento viral.

PALAVRAS-CHAVE:
IBR; sêmen; PCR.