RESUMO
A sensibilidade e especificidade de uma nested reação em cadeia da polimerase (nested PCR) para detecção do vírus da leucose bovina (VLB) foi avaliada em amostras de sangue bovino, como uma metodologia confiável para diagnóstico preciso de animais naturalmente infectados. O protocolo de nested PCR padronizado, baseia-se na identificação de fragmentos de 340 pb e 444 pb do DNA de VLB, produzidos pela utilização de 2 diferentes conjuntos de primers do gene env proviral. Este protocolo foi validado através de testes em 40 amostras de sangue bovino de um rebanho leiteiro VLB positivo e pela comparação dos resultados com o diagnóstico sorológico por imunodifusão em gel de ágar (IDGA) e por ensaio imunoenzimático (ELISA). O protocolo de nested PCR foi capaz de discriminar animais infectados dentre aqueles que foram diagnosticados sorologicamente como negativos. Esse ensaio mostrou ter aplicabilidade, também, a outros fluídos corporais ou amostras de tecidos. Investigações feitas em 40 amostras de sangue bovino mostraram que 37 animais foram positivos para VLB com ELISA, 36 com nested PCR e somente 25 com IDGA. O nested PCR demonstrou uma concordância nos resultados com o ELISA em até 95%. Esses resultados comprovaram que o nested PCR pode ser indicado para uma detecção precoce, sensível e direta do VLB em bovinos naturalmente infectados. Comparado com os testes sorológicos, esse método mostra-se mais adequado para a identificação de bovinos infectados possuindo títulos de anticorpo anti-VLB baixos, transientes ou ausentes. Além disso, esse ensaio pode ser usado para confirmar os resultados sorológicos duvidosos ou a infecção em bovinos assintomáticos. O nested PCR é uma metodologia valiosa para uma rápida investigação epidemiológica do VLB, assim como para a vigilância sanitária da leucose bovina.
PALAVRAS-CHAVE:
Vírus da leucose bovina; diagnóstico; nested PCR.
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