RESUMO
Desenvolveu-se uma reação de "nested PCR" direcionada para o gene do ectodomínio S1 da glicoproteína S dos coronavírus para a detecção de coronavírus bovino (BCoV) em amostras fecais. Foram desenhados um par de primers externos e um par de primers internos para regiões conservadas flanqueando a região hipervariável do gene S (GenBank accession No. M31053). Os primers externos produziram um fragmento de 885pb (nn 1204 ao 2088 do gene S) e os internos um fragmento de 488bp (nn 1329 ao 1816 do gene S, interno ao produto do primeiro PCR). Temperaturas ótimas de hibridação dos primers foram testadas em um termociclador com gradiente e utilizadas no protocolo final. Os limites de detecção para os primers externos e para o protocolo "nested" final foram testados com a amostra Kakekawa de BCoV diluída em base 2, em uma suspensão de fezes livre de BCoV. O protocolo final de "nested" foi testado em 22 amostras de fezes de bezerros diarréicos e não-diarreicos e em uma amostra de uma vaca com diarréia, resultando em 10 amostras positivas entre fezes diarréicas e não-diarreicas. O nested PCR aqui relatado é uma ferramenta específica e sensível para o diagnóstico de coronavírus bovino.
PALAVRAS-CHAVE:
Coronavírus; bovino; diagnóstico; PCR.