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IMPORTÂNCIA DO DIAGNÓSTICO DIFERENCIAL EM UM SURTO DE PNEUMONIA ENZOÓTICA BOVINA

IMPORTANCE OF DIFFERENTIAL DIAGNOSIS IN AN OUTBREAK OF BOVINE ENZOOTIC PNEUMONIA

RESUMO

A pneumonia enzoótica é uma doença infecciosa emergente que ocorre em bovinos jovens, geralmente, confinados em grupos. Esta enfermidade está associada aos modernos sistemas de manejo intensivo em rebanhos de corte e leite. Mycoplasma dispar, M. bovis, Ureaplasma diversum, Pasteurella haemolytica (Mannheimia haemolytica), P. multocida, Haemophilus somnus, vírus sincicial respiratório, vírus da parainfluenza 3 e herpesvírus bovino 1 são os principais microrganismos encontrados, muitas vezes em sinergismo. Um surto da enfermidade foi observado em quatro propriedades rurais no Estado de São Paulo em 2001 e o diagnóstico diferencial detalhado levou à resolução dos casos, colocando em evidência a sia necessidade.

PALAVRAS-CHAVE:
Mycoplasma bovis; pneumonia enzoótica; bovino; diagnóstico.

ABSTRACT

Enzootic pneumonia is an emergent infectious disease that occurs in young bovine, generally confined in groups. This illness is associated to the modern systems of intensive handling in milk and beef herds. Mycoplasma dispar, M. bovis, Ureaplasma diversum, Pasteurella haemolytica (Mannheimia haemolytica), P. multocida, Haemophilus somnus, bovine respiratory syncytial virus (BRSV), parainfluenza virus 3 and bovine herpesvírus 1 are the main microorganisms found, often in synergism. An outbreak of the illness was observed in four farms in São Paulo State in 2001 and the detailed led to the solution of these cases, clearly demonstrating the value of such diagnosis.

KEY WORDS:
Mycoplasma bovis; enzootic pneumonia; bovine; diagnosis.

O sistema respiratório bovino está constantemente exposto a microrganismos potencialmente patogênicos porém, na maioria das vezes, os animais permanecem saudáveis devido às defesas pulmonares. Quando as funções pulmonares são prejudicadas e/ou o tecido pulmonar sofre alguma lesão, vários são os microrganismos que podem se estabelecer e iniciar um processo infeccioso. Desta forma, pneumonias bacterianas são as causas mais freqüentes e sérias de mortalidades e perdas econômicas associadas à doenças respiratórias bovinas (MOSIER, 1997MOISER, D.A. Bacterial Pneumonia. Vet. Clin. North Am. Food An. Pract., v.13, n.3, p.483-493, 1997.).

A pneumonia enzoótica é uma doença infecciosa emergente que ocorre em bovinos jovens, geralmente, confinados em grupos. Esta enfermidade está associada aos modernos sistemas de manejo intensivo em rebanhos de corte e leite. Mycoplasma dispar, M. bovis, Ureaplasma diversum, Pasteurella haemolytica (Mannheimia haemolytica), P. multocida, Haemophilus somnus, vírus sincicial respiratório, vírus da parainfluenza 3 e herpesvírus bovino 1 são os principais microrganismos encontrados, muitas vezes em sinergismo (FRASER, 1991FRASER, C.M. Manual Merck de veterinária: um manual de diagnóstico, tratamento, prevenção e controle de doenças para o veterinário. 6. ed. São Paulo: Roca, 1991. 1803 p.).

Em um surto da doença, ocorrido no inverno de 2001 em quatro propriedades localizadas no Estado de São Paulo, foi observada morbidade de 100% em animais com menos de um ano de idade, índice compatível com as características da enfermidade, sendo que quatro animais foram a óbito. Os sinais clínicos observados foram: tosse produtiva, polipnéia, anorexia com rápida perda de peso e prostração. Dados epidemiológicos revelaram que animais de todas as propriedades envolvidas haviam participado de uma mesma exposição agropecuária dias antes do aparecimento dos sinais clínicos.

Visando o diagnóstico, um dos bezerros acometidos foi sacrificado e à necropsia foi observada grande produção de secreção gelatinosa e purulenta ao longo de brônquios e bronquíolos, focos de necrose coagulativa e acúmulo de gás no tecido (Figs. 1 e 2). Os lóbulos pulmonares e a traquéia foram encaminhados para pesquisa dos possíveis agentes envolvidos.

Fig. 1
Pulmão de bezerro - aproximadamente um ano de idade apresentando acúmulo generalizado de ar nas vias respiratórias inferiores, focos de necrose coagulativa e presença de secreção purulenta.

Fig. 2
Lóbulos pulmonares - acúmulo de gás e lesões macroscópicas de necrose coagulativa.

Anteriormente ao diagnóstico laboratorial, a droga tilosina foi utilizada no tratamento, porém, não houve resolução dos casos.

Laboratorialmente, foram processados para a presença ou ausência de bactérias os seguintes materiais clínicos: secreção bronquial, secreção traqueal e macerado de fragmento pulmorar. Para a triagem bacteriológica foram utilizados os meios de cultura ágar brucela sangue, ágar BHI sangue e EMB-Levine (CARTER & CHENGAPPA, 1991CARTER, R.G. & CHENGAPPA, M.M. Essential of veterinary bacteriology and mycology. 4. ed. Philadelphia: Lea & Febiger, 1991. 284p.), os quais foram incubados em aerobiose e microaerofilia. Hayflick e U10 modificados (caldo e ágar) foram utilizados para isolamento de Mycoplasma spp. e Ureaplasma diversum, respectivamente, como preconizado por RUHNKE & ROSENDAL (1994)RUHNKE, H.L. & ROSENDAL, S. Useful protocols for diagnosis of animal mycoplasmas. In: WHITFORD, H.W.; ROSENBUSCH, R.F.; LAUERMAN, L., (Eds.) Mycoplasmosis in Animals: laboratory diagnosis. Iowa: Iowa State University Press, 1994. p.141-155.. No diagnóstico complementar, a técnica de PCR foi utilizada para detecção de Mycoplasma spp., Ureaplasma diversum, Haemophilus somnus e Herpesvírus Bovino tipos 1 e 5 a partir do DNA extraído dos materiais clínicos. Outros possíveis agentes virais foram também pesquisados por cultivo celular.

Para a realização da PCR, o DNA foi primeiramente extraído pela técnica de fenol-clorofórmio (SAMBROOK et al., 1989SAMBROOK, J.; FRITSCH, E.F.; MANIATIS, T. Molecular cloning: a laboratory manual. 2. ed., New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, 957p.) que não apresentou bons resultados (Fig. 3), especialmente no processamento do macerado de fragmento pulmonar, e posteriormente pela técnica do CTAB (ROGERS & BENDICH, 1994ROGERS, S.O. & BENDICH, A.J. Extraction of total cellular DNA from plants, algae and fungi. In: GELVIN,B . & SCHILPERROOT, R.A. (Eds.) Plant Molecular Biology Manual. Belgium: Kluwer Academic Publishers, 1994. v.D1, p.1-8.).

Fig. 3
Linha 1- marcador de peso molecular 100 bp; Linha 2- macerado de fragmento pulmonar; Linha 3- cultivo de fragmento pulmonar; Linha 4- muco traqueal; Linha 5cultivo de muco traqueal; Linha 6- controle negativo; Linha 7- controle positivo (Mycoplasma bovis ATCC 25025).

Os microrganismos isolados foram Mycoplasma spp. (meio Hayflick modificado) e Pasteurella haemolytica (ágar brucela sangue).

Para a caracterização da estirpe de Mycoplasma isolada, foram realizadas as provas bioquímicas de fermentação de glicose, atividade de fosfatase, hidrólise de arginina e redução de tetrazólio (RAZIN & TULLY, 1983RAZIN, S & TULLY, J.C. Methods in mycoplasmology. Londres: Academic Press, 1983. v.1, p.506.), técnica de PCR (SUBRAMANIAN et al., 1998SUBRAMANIAN, S.; BERGONIER, D.; POUMARAT, F.; CAPAUL, S.; SCHLATTER, Y.; NICOLET, J.; FREY, J. Specie identification of Mycoplasma bovis and Mycoplasma agalactiae based on the uvrC gene by PCR. Mol. Cell. Probes, v.12, p.161169, 1998.), e Imunoperoxidase (KOTANI & MCGARRITY, 1985KOTANI, H. & MCGARRITY, G. Rapid and simple identification of Mycoplasma by Immunobinding. J. Immunol. Methods, v.85, p.257-267, 1985.).

Estas técnicas possibilitaram a identificação de Mycoplasma bovis. A técnica de PCR confirmou a presença de M. bovis nos materiais clínicos e a ausência de Haemophilus somnus e Herpesvírus Bovino 1 e 5. O isolamento viral foi negativo.

Após o diagnóstico laboratorial, foi preconizado o tratamento com enrofloxacina comercial, já que esta é uma das possíveis drogas de escolha para tratamento das micoplasmoses (HANNAN et al., 1997HANNAN, P.C.T.; WINDSOR, G.D.; JONG, A.; SCHMEER, N.; STEGEMANN, M. Comparative susceptibilities of various animal-pathogenic mycoplasmas to fluoroquinones. Antimicrob. Agents Chemother., v.41, n.9, p.2037-2040, 1997.). Tendo os animais apresentado boa resposta à medicação, os casos clínicos foram resolvidos.

ROSSINI et al. (1978)ROSSINI, A.J.; JULLY, J.R.; JEREZ, J.A. Mycoplasma sp. isoladas do tecido pulmonar de bezerros acometidos de pneumonia. Arq. Inst. Biol., São Paulo, v.45, n.4, p.213-214, 1978. descreveram pela primeira vez no país, o isolamento de Mycoplasma spp. a partir de tecido pulmonar de quatro bezerros que apresentavam quadro pneumônico e que foram a óbito. Posteriormente (ROSSINI et al., 1981ROSSINI, A.J.; ZELANTE, F.; JULY, J.R.; OLIVEIRA JR., B.S. Mycoplasmose bovina: isolamento de Mycoplasma bovis de bezerros acometidos de penumonia. Arq. Inst. Biol., São Paulo, v.48, n.1/4, p.5-10, 1981.), uma das estirpes isolada foi caracterizada como M. bovis, sendo este o primeiro relato da espécie no Brasil.

A escassez de laboratórios veterinários que realizem exames para micoplasmoses dificulta o diagnóstico das pneumonias em animais domésticos e de produção, o que leva à utilização imprópria de antibióticos colaborando assim, na disseminação de resistência microbiana. Assim sendo, os técnicos devem ser alertados para a necessidade do diagnóstico diferencial rápido e eficiente nos casos de doenças multifatoriais, incluindo-se as pneumonias.

De posse destas informações, conclui-se que devido à variedade de agentes infecciosos possivelmente envolvidos no quadro, um diagnóstico diferencial rápido e eficiente pode auxiliar os clínicos veterinários para que o correto tratamento seja prontamente instituído.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

  • CARTER, R.G. & CHENGAPPA, M.M. Essential of veterinary bacteriology and mycology 4. ed. Philadelphia: Lea & Febiger, 1991. 284p.
  • FRASER, C.M. Manual Merck de veterinária: um manual de diagnóstico, tratamento, prevenção e controle de doenças para o veterinário. 6. ed. São Paulo: Roca, 1991. 1803 p.
  • HANNAN, P.C.T.; WINDSOR, G.D.; JONG, A.; SCHMEER, N.; STEGEMANN, M. Comparative susceptibilities of various animal-pathogenic mycoplasmas to fluoroquinones. Antimicrob. Agents Chemother, v.41, n.9, p.2037-2040, 1997.
  • KOTANI, H. & MCGARRITY, G. Rapid and simple identification of Mycoplasma by Immunobinding. J. Immunol. Methods, v.85, p.257-267, 1985.
  • MOISER, D.A. Bacterial Pneumonia. Vet. Clin. North Am. Food An. Pract., v.13, n.3, p.483-493, 1997.
  • RAZIN, S & TULLY, J.C. Methods in mycoplasmology. Londres: Academic Press, 1983. v.1, p.506.
  • ROGERS, S.O. & BENDICH, A.J. Extraction of total cellular DNA from plants, algae and fungi. In: GELVIN,B . & SCHILPERROOT, R.A. (Eds.) Plant Molecular Biology Manual Belgium: Kluwer Academic Publishers, 1994. v.D1, p.1-8.
  • ROSSINI, A.J.; JULLY, J.R.; JEREZ, J.A. Mycoplasma sp. isoladas do tecido pulmonar de bezerros acometidos de pneumonia. Arq. Inst. Biol, São Paulo, v.45, n.4, p.213-214, 1978.
  • ROSSINI, A.J.; ZELANTE, F.; JULY, J.R.; OLIVEIRA JR., B.S. Mycoplasmose bovina: isolamento de Mycoplasma bovis de bezerros acometidos de penumonia. Arq. Inst. Biol, São Paulo, v.48, n.1/4, p.5-10, 1981.
  • RUHNKE, H.L. & ROSENDAL, S. Useful protocols for diagnosis of animal mycoplasmas. In: WHITFORD, H.W.; ROSENBUSCH, R.F.; LAUERMAN, L., (Eds.) Mycoplasmosis in Animals: laboratory diagnosis. Iowa: Iowa State University Press, 1994. p.141-155.
  • SAMBROOK, J.; FRITSCH, E.F.; MANIATIS, T. Molecular cloning: a laboratory manual. 2. ed., New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989, 957p.
  • SUBRAMANIAN, S.; BERGONIER, D.; POUMARAT, F.; CAPAUL, S.; SCHLATTER, Y.; NICOLET, J.; FREY, J. Specie identification of Mycoplasma bovis and Mycoplasma agalactiae based on the uvrC gene by PCR. Mol. Cell. Probes, v.12, p.161169, 1998.

Datas de Publicação

  • Publicação nesta coleção
    16 Set 2024
  • Data do Fascículo
    Jul-Sep 2002

Histórico

  • Recebido
    14 Mar 2002
  • Aceito
    30 Abr 2002
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