Atividade proteolítica total e biomassa de uma linhagem de Bacillus sp. termofílico foram analisados em vários níveis de pH inicial e temperatura utilizando a metodologia de superfície de resposta. O meio mineral com extrato de levedura (0.01%) e amido (1%) foi utilizado no experimento. Os resultados de análise estatística da metodologia de resposta de superfície definiram um modelo polinomial para a biomassa e atividade proteolítica da linhagem de Bacillus sp. com alto coeficiente de determinação (R² = 0.8), mostrando um ajuste satisfatório do modelo estatístico obtido com os dados experimentais. Os valores de p mostraram que a temperatura e pH tiveram efeito significante em biomassa e atividade total (P <0.05) da linhagem testada. A atividade proteolítica mais alta (2.368 U/ml/h) da linhagem de Bacilus sp. foi prevista pelas curvas de superfície de resposta em temperatura a 41º C e pH igual a 4.8. Os valores de biomassa altos foram previstos para ampla faixa de temperatura e pH.