O objetivo deste estudo foi avaliar a formação do biofilme de Streptococcus mutans crescido em resina restauradora envelhecida e não-envelhecida, submetidas à radiação terapêutica. Sessenta e quatro discos do material restaurador Filtek Supreme foram divididos em 2 grupos: grupo envelhecido (AG) e grupo não-envelhecido (NAG) e cada grupo foi dividido em 4 sub-grupos: não-irradiado e irradiado com 10Gy, 35Gy e 70Gy. O biofilme de S. mutans UA159 foi produzido na superfície de ambos os discos AG e NAG. As unidades formadoras de colônia/mL (UFC/mL) foram avaliadas por ANOVA e teste de Tukey (α=0,05). O grupo AG demonstrou menores quantidades de UFC/mL que o grupo NAG antes da radiação e após a radiação de 10Gy (p<0,05). Os sub-grupos AG irradiados com 35 e 70Gy demonstraram aumento na quantidade de biofilme quando comparado aos não irradiados e irradiados com 10Gy (p<0,05). A exposição à radiação ionizante nas doses terapêuticas promoveu mudanças na aderência bacteriana no material restaurador.