O teste de redução do 2,3-bis (2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino) carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide (XTT) tem sido utilizado para mensurar o desenvolvimento de biofilmes de Candida. Contudo, a reação de XTT é dependente da atividade celular e o seu uso para biofilmes maduros pode ser questionado, considerando que diferentes camadas celulares têm atividade metabólica diferenciadas. O objetivo deste estudo foi avaliar se a adição de glicose à formula de XTT diminuiria a variabilidade na mensuração da atividade metabólica. Biofilmes de Candida albicans ATCC 90028 com tempos de crescimento de 24, 48 e 72 h foram utilizados. Para avaliar o melhor tempo de incubação do XTT, este foi mantido a temperatura de 37 °C, em tempos de 90 180 e 270 min. A fórmula padrão do teste XTT (controle) foi modificada com a adição de 50, 100 e 200 mM de glicose para os grupos experimentais. Os melhores resultados para a incubação foi observado com tempo de 180 min e para a suplementação de glicose à concentração de 200 mM (p<0.001). Concluiu-se que a incubação de 180 min utilizando a suplementação de 200 mM de glicose apresenta resultados de atividade metabólica celular com a menor variação para o estudo de biofilmes de Candida albicans.