Desenvolvimento de método de PCR multiplex em tempo real para a detecção de Pseudomonas savastanoi pv. glycinea e Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens, em sementes de soja

Resumo

A PCR Multiplex em tempo real com sondas TaqMan^® foi desenvolvida para a detecção simultânea de patógenos da soja Pseudomonas savastanoi pv. glycinea e Curtobacterium flaccumfaciens pv. flaccumfaciens. A especificidade do método foi confirmada utilizando 25 cepas de bactérias alvo e 18 cepas de outras bactérias comuns a sementes de soja como endófitas. A PCR multiplex em tempo real desenvolvida demonstrou alta sensibilidade, uma vez que, um resultado positivo foi alcançado a 0,01 ng/µl de DNA para ambos os organismos - alvo e a 100 ufc/ml de bactérias em homogeneizado de sementes de soja. A robustez da PCR multiplex em tempo real desenvolvida foi verificada pela detecção dos patógenos em 25 estoques comerciais de sementes, em comparação com protocolos de PCR publicados anteriormente. Em todos os testes, 3 estoques de sementes foram positivos e 22 negativos. Dessa maneira, é possível afirmar que a PCR multiplex em tempo real pode ser aplicada em diagnóstico.

Palavras-chave:
Pseudomonas savastanoi; Curtobacterium flaccumfaciens; PCR; soja; doenças bacterianas