OBJETIVO:
Analizar el efecto de los productos de proteína de las células endoteliales (CEs) en el metabolismo celular del anillo fibroso (AF) en sistema in vitro de cultivo controlado.
MÉTODOS:
Las células del AF humano se ampliaron en monocapa y se las trató con las proteínas obtenidas a partir de los medios de cultivo de la línea de células HMEC-1 (Human Microvascular Endothelial Cells) (125µg/ml). Después de 72h de tratamiento, se aisló el ARN de las células de AF para el análisis de la expresión génica y se recogió el medio de cultivo para el análisis de expresión de la proteína.
RESULTADOS:
El análisis de qRT-PCR demostró una mayor expresión génica de las metaloproteinasas de matriz (MMP) en las células tratadas con productos de proteína de AF en las células endoteliales, en comparación con el grupo de control de células AF: MMP-1 243,10 veces (p < 0,05), MMP-2 1,37 veces (p < 0,05), MMP-3 39,83 veces (p < 0,05) y MMP-13 5,70 veces (p < 0,05). En contraste, los inhibidores tisulares de las metaloproteinasas (TIMP), presentaron supresión de la expresión del gen TIMP-2 (0,55 veces) (p < 0,05) y TIMP-3 (0,60 veces) (p < 0,05) en los grupos expuestos. La expresión génica de agrecano (0,83 veces) (p < 0,05), importante componente de la matriz extracelular, también se redujo. La detección de MMP-1 y de MMP-3 fue realizada y se confirmaron los resultados de la PCR mediante la técnica Western Blot.
CONCLUSIONES:
En el presente estudio se observó que las proteínas producidas por las CEs indujeron la expresión de MMP y suprimieron la expresión del TIMP y de agrecano en células primarias del disco intervertebral humano, con el objetivo de desarrollar posibles tratamientos para la degeneración del disco intervertebral y el dolor discogénico asociado.
Disco intervertebral; Neovascularización patológica; Metaloproteinasas de la matriz
