OBJETIVO:
Analisar o efeito de produtos proteicos de células endoteliais (CEs) sobre o metabolismo de células de ânulo fibroso (AF) em ambiente controlado de cultura celular in vitro.
MÉTODOS:
Células de AF humano foram expandidas em camada única e tratadas com proteínas obtidas a partir do meio de cultura de células da linhagem celular HMEC-1 (Human Microvascular Endothelial Cells) (125µg/ml). Após 72h de tratamento, isolou-se RNA das células de AF para análise da expressão gênica e coletou-se meio de cultura para análise de expressão proteica.
RESULTADOS:
A análise da qRT-PCR demonstrou aumento da expressão gênica das metaloproteinases de matriz (MMPs) nas células de AF tratadas com produtos proteicos das células endoteliais, em comparação com grupo controle de células de AF: MMP-1 243,10 vezes (p < 0,05), MMP-2 1,37 vezes (p < 0,05), MMP-3 39,83 vezes (p < 0,05) e MMP13 5,70 vezes (p < 0,05). Em contraste, os inibidores teciduais das metaloproteinases (TIMPs) apresentaram supressão da expressão gênica de TIMP-2 (0,55 vezes) (p < 0,05) e TIMP-3 (0,60 vezes) (p < 0,05) nos grupos expostos. A expressão do gene agrecan (0,83 vezes) (p < 0,05), componente importante da matriz extracelular, também estava diminuída. Foi realizada detecção de MMP-1 e MMP-3, confirmando os resultados de PCR através de técnica de Western Blot.
CONCLUSÕES:
Neste estudo observamos que proteínas produzidas pelas CEs induziram a expressão de MMPs e suprimiram a expressão de TIMPs e agrecan nas células primárias do disco intervertebral humano, objetivando desenvolvimento de potenciais terapias no tratamento da degeneração do disco intervertebral e dor discogênica associada.
Disco intervertebral; Neovascularização patológica; Metaloproteinases da matriz
