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Influence of the electrokinetic injection conditions on the separation of DNA fragments in capillary electrophoresis

Em análises genéticas por eletroforese capilar com soluções poliméricas existem muitas variáveis que afetam a separação dos fragmentos de DNA. Uma das mais críticas é o processo da injeção da amostra, a qual pode afetar consideravelmente a eficiência e a resolução dos picos. Neste trabalho, estudou-se a influência da composição da amostra e as condições da injeção eletrocinética na separação dos fragmentos de DNA em eletroforese capilar com solução polimérica renovável. Os estudos foram realizados injetando-se eletrocineticamente as amostras do DNA sob uma variedade de condições tais como, a força iônica da amostra e sua capacidade tamponante e a qualidade da matriz de separação. Em todos os experimentos, os fragmentos de DNA foram corados com brometo de etídio para detecção por fluorescência induzida a laser e separados sob um campo elétrico de 200 V cm-1 em uma coluna capilar revestida com polialcoolvinílico e preenchida com uma solução 0,5% de hidroxietilcelulose como matriz de separação. Sob estas condições de análise, a composição da amostra deve conter entre 1 e 5 mmol L-1 de tampão de separação para a obtenção de injeções reprodutíveis com um coeficiente de variação menor que 4% tanto para o tempo de migração quanto para a quantidade de material injetado.


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