Este trabalho apresenta a confirmação e otimização do método para derivatização de glifosato e ácido aminometilfosfônico (AMPA) utilizando cloroformiato de 9-fluorenilmetila (FMOC-Cl) avaliando-se os parâmetros: concentração de tampão borato e de FMOC-Cl, tempo de homogeneização e de reação, comprimento de onda e solvente de lavagem. A reação foi promovida com sucesso e o método é simples e de fácil execução pois utiliza cinco minutos de homogeneização e permite análises no ultravioleta imediatamente após o fim da reação.