RESUMO
OBJETIVOS
A toxoplasmose é uma infecção parasitária a protozoário. As formas cerebrospinal, ocular e congênita da doença são graves e apresentam risco de morte. O diagnóstico da toxoplasmose é difícil devido à necessidade de amostragem invasiva, a complicações patogenéticas, imunológicas e relativas à interpretação dos resultados dos testes. O uso de urina como fonte de amostra não invasiva para o diagnóstico molecular da toxoplasmose é o principal objetivo desta pesquisa. Foram feitas tentativas para diagnosticar toxoplasmose utilizando a reação em cadeia de polimerase (PCR) sobre ácido desoxirribonucleico do parasita (ADN) na urina.
MÉTODOS
Parasita: a cepa RH de Toxoplasma gondii (T. gondii) foi obtida a partir de exsudato peritoneal de camundongos brancos de laboratório inoculados com 5x105 taquizoítos três dias antes da coleta de aspiração. As amostras de urina com números definidos de taquizoítos por ml foram usados como amostras de laboratório. Um segmento bp 529 (banco de genes AF146527) do genoma do T. gondii com 200-300 repetições foi usado como alvo em PCR. As sequências de "primers" selecionados foram analisadas.
RESULTADOS
A técnica "semi-nested" de PCR multiplex foi desenvolvida para a obtenção de um método para o diagnóstico preciso da toxoplasmose, com economia de tempo e de orçamento e reduzindo o risco de contaminação cruzada de DNA. O método mostrou-se sensível para detectar 2 taquizoítos de DNA por amostra final.
CONCLUSÃO
Com o desenvolvimento, a técnica de "semi-nested" PCR pode ser um método útil e não-invasivo para o diagnóstico de toxoplasmose cerebrospinal, ocular e congênita.
