Como regular a expressão de genes no floema? Um estudo de caso com promotores de genes de citros preferencialmente expressos

Resumo

Novas abordagens para o desenvolvimento de organismos geneticamente modificados, resistentes a doenças, incluem alvos específicos de expressão gênica, visando a aumentar as chances de controle do patógeno. A expressão gênica, induzida por promotores de genes de Citrus sinensis, derivados do floema, poderia ser avaliada e comparada com aquela induzida por um promotor constitutivo no mesmo tecido, levando à produção de laranjas-doces transgênicas, potencialmente mais resistentes a doenças causadas por bactérias de floema. Plantas de citrange ‘Carrizo’ [Poncirus trifoliata (L.) Raf. x Citrus sinensis (L.) Osbeck] foram transformadas, via Agrobacterium tumefaciens, com o vetor binário pCAMBIA2301 contendo o gene uidA (ß-glucuronidase), dirigido pelo promotor constitutivo CaMV35S (CaMV35S :: uidA) ou pelos promotores de citros CsPP2.B1 (CsPP2 .B1 :: uidA) ou CsVTE2 (CsVTE2 :: uidA). Brotos regenerados in vitro foram enxertados em limão ‘Cravo’ (C. limonia Osbeck). A transformação genética foi confirmada por análises de Southern blot. A expressão do gene uidA foi avaliada por RT-qPCR, e a histolocalização do gene, dirigida por esses três promotores, foi acessada por seções de ramos tratadas com X-GLUC. A expressão do gene uidA, exibida por promotores específicos de tecido, foi, em geral, menor do que a do promotor constitutivo CaMV35; no entanto, as construções dirigidas por promotores específicos de tecido podem levar à expressão em tecidos restritos. Os promotores CsPP2.B1 e CsVTE2 podem ser considerados adequados para utilização em construções gênicas, visando à resistência a doenças.

Termos para indexação Candidatus Liberibacter spp.; resistência a doenças; transformação genética; GUS; histolocalização