Anticorpo policlonal de ovinos para mapear mimetopos de <i>Haemonchus contortus</i> usando a biblioteca de <i>Phage display</i>

Buzatti, Andréia; Fernandez, Arnielis Diaz; Arenal, Amilcar; Pereira, Erlán; Monteiro, Alda Lucia Gomes; Molento, Marcelo Beltrão

doi:10.1590/S1984-296120180023

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Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária

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Sumário

Original Article • Rev. Bras. Parasitol. Vet. 27 (02) • Apr-Jun 2018 • https://doi.org/10.1590/S1984-296120180023 copiar

Anticorpo policlonal de ovinos para mapear mimetopos de Haemonchus contortus usando a biblioteca de Phage display

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Resumo

O objetivo deste estudo foi avaliar a tecnologia de phage display no mapeamento de mimetopos de Haemonchus contortus. Anticorpo policlonal de ovinos anti-H. contortus foi usado para seleção a partir da biblioteca PhD-7 Phage Display Peptide Library Kit (New England BioLabs). Após quatro rodadas, 50 clones de fagos expressando peptídeos foram selecionados e sequenciados. Dois clones que exibiram mimetopos de H. contortus foram escolhidos para imunização de ovinos: clone 6 – mimetopo de gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) e clone 17 - mimetopo da família do músculo desorganizado (Dim 1). Doze ovinos foram alocados em 3 grupos de 4 animais, da seguinte forma: G1: grupo controle, G2/GAPDH: imunizado com o clone 6 e G3/Dim1: imunizado com o clone 17. Quatro imunizações foram realizadas (0, 7, 14 e 21 dias). No dia 28 após a primeira imunização, todos os grupos foram desafiados oralmente com 2500 larvas infectantes de H. contortus . Os peptídeos mimetopos selecionados foram reconhecidos por IgG de ovinos naturalmente infectados por H. contortus. O ensaio de imunização revelou um aument dos títulos de IgG anti-fago M13, mas não ocorreu aumento de IgG anti-peptídeos mimetopos. Este é o primeiro relato de uso bem sucedido da biblioteca de Phage display para a identificação de mimetopos de H. contortus.

Palavras-chave:
Mimetopos; biopanning; ELISA; ruminantes; imunogênicos

Day of experiment	GAPDH	Dim 1	Control
Hemoglobin (g/dl)
Day 0	10.64 ± 2.90	11.90 ± 2.92	11.03 ± 4.05
Day 14	14.50 ± 2.23	11.66 ± 3.82	13.37 ± 3.03
Day 28	11.75 ± 2.42	13.52 ± 3.97	13.20 ± 2.02
Day 44	12.56 ± 2.68	14.73 ± 1.68	14.28 ± 3.05
Day 50	13.89 ± 1.96	14.41 ± 2.06	13.10 ± 0.81
Total leukocytes (x 10³/µL)
Day 0	11.85 ± 2.06	12.00 ± 1.48	12.12 ± 1.42
Day 14	12.20 ± 2.14	10.97 ± 0.28	12.12 ± 1.38
Day 28	11.07 ± 1.96	10.70 ± 2.09	12.50 ± 1.58
Day 44	11.37 ± 1.15	12.47 ± 0.75	12.27 ± 1.61
Day 50	12.05 ± 2.04	10.92 ± 1.90	12.57 ± 1.19
Lymphocytes (%)
Day 0	58.75 ± 3.86	59.50 ± 4.72	57.50 ± 2.38
Day 14	68.00 ± 8.16	64.50 ± 6.35	66.00 ± 6.22
Day 28	61.00 ± 4.08	65.00 ± 0.82	61.50 ± 1.91
Day 44	59.25 ± 3.30	53.75 ± 0.50	56.75 ± 6.95
Day 50	64.25 ± 3.77	62.00 ± 6.22	60.50 ± 2.65
Neutrophil (%)
Day 0	36.75 ± 3.30	36.75 ± 3.77	39.00 ± 2.44
Day 14	26.75 ± 7.80	31.00 ± 5.35	30.00 ± 6.48
Day 28	34.25 ± 3.59	31.00 ± 1.56	32.75 ± 1.72
Day 44	36.00 ± 3.37	41.25 ± 1.73	37.00 ± 5.71
Day 50	30.75 ± 2.75	32.75 ± 5.44	34.50 ± 2.38
Eosinophil (%)
Day 0	2.25 ± 0.50	1.25 ± 0.50	1.50 ± 0.58
Day 14	2.25 ± 0.50	2.25 ± 0.50	1.75 ± 0.96
Day 28	1.75 ± 0.50	1.75 ± 0.96	2.75 ± 1.26
Day 44	1.75 ± 0.50	1.50 ± 0.58	2.25 ± 0.50
Day 50	2.50 ± 0.58	1.75 ± 0.96	1.75 ± 0.50
Monocytes (%)
Day 0	1.50 ± 1.00	1.75 ± 0.50	1.50 ± 0.58
Day 14	1.50 ± 0.58	1.25 ± 0.50	1.75 ± 0.50
Day 28	2.00 ± 0.82	1.50 ± 0.58	2.00 ± 0.82
Day 44	2.00 ± 0.82	1.75 ± 0.50	1.75 ± 0.96
Day 50	1.75 ± 0.50	1.50 ± 0.58	1.25 ± 0.50
Basophils (%)
Day 0	0.25 ± 0.50	0.50 ± 0.58	0.50 ± 0.58
Day 14	1.25 ± 0.96	0.75 ± 0.96	0.50 ± 0.58
Day 28	0.75 ± 0.50	0.50 ± 0.58	0.00 ± 0.00
Day 44	0.50 ± 0.58	0.75 ± 0.96	1.50 ± 0.58
Day 50	0.25 ± 0.50	1.50 ± 0.58	1.25 ± 0.96

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E-mail: cbpv_rbpv.fcav@unesp.br

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[1] * Corresponding author: Andréia Buzatti. Laboratório de Doenças Parasitárias, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal do Paraná – UFPR, Rua dos Funcionários, 1540, CEP 80035-050, Curitiba, PR, Brasil. e-mail: deiabuzatti@gmail.com