Abordagens fenotípica e genotípica para detecção de resistência anti-helmíntica em nematoides gastrintestinais de ovinos no nordeste do Brasil

Araújo-Filho, José Vilemar de; Ribeiro, Wesley Lyeverton Correia; André, Weibson Paz Pinheiro; Cavalcante, Géssica Soares; Santos, Jéssica Maria Leite dos; Monteiro, Jomar Patrício; Macedo, Iara Tersia Freitas; Oliveira, Lorena Mayana Beserra de; Bevilaqua, Claudia Maria Leal

doi:10.1590/S1984-29612021048

Brasil

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Original Article • Rev. Bras. Parasitol. Vet. 30 (2) • 2021 • https://doi.org/10.1590/S1984-29612021048 linkcopiar

Abordagens fenotípica e genotípica para detecção de resistência anti-helmíntica em nematoides gastrintestinais de ovinos no nordeste do Brasil

Autoria SCIMAGO INSTITUTIONS RANKINGS

Resumo

O objetivo deste estudo foi caracterizar a resistência anti-helmíntica (RA) da população de nematoides gastrintestinais de ovinos, denominada Caucaia, do Nordeste brasileiro. Os testes fenotípicos foram: eclosão de ovos (TEO), desenvolvimento larvar (TDL) e redução da contagem de ovos nas fezes (TRCOF). A avaliação genotípica para benzimidazóis (BZs) foi por frequência de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) F200Y, F167Y e E198A; e para levamisol (LEV), pela frequência alélica para resistência no gene Hco-acr-8. Os “primers” foram específicos para Haemonchus contortus. As concentrações efetivas 50% (CE50) para BZs (TEO) e para lactonas macrocíclicas (LMs) e LEV (TDL) foram 1,02 µg/mL, 1,81 ng/mL e 0,04 µg/mL, respectivamente. Os fatores de resistência para LMs e LEV foram 0,91 e 3,07, respectivamente. As eficácias para BZs, LMs, monepantel (MPTL) e LEV no TRCOF foram 52,4; 87,0; 94,5 e 99,6%, respectivamente. A qPCR para BZs demonstrou frequências de 0%, 26,24% e 69,08% para SNPs E198A, F200Y e F167Y, respectivamente. Para LEV foram encontrados 54,37% de alelos resistentes. Houve concordância entre TEO, TRCOF e qPCR para BZs, e entre TDL e qPCR para LEV. Baseada na maior sensibilidade da qPCR e avaliação fenotípica, a população Caucaia foi considerada resistente a BZs, LMs, LEV e suspeita para MPTL.

Palavras-chave: Nematoide; pequenos ruminantes; resistência anti-helmíntica; diagnóstico; qPCR

Anthelmintics	Day 0	Day 7	Day 14	Day 21
Albendazole
Mean epg	2,246±1,928^a	1,067±1,682^b	2,317±3,756^a	1,600±2,287^a
Efficacy (CI)	-	52.4 (-15-86)	0	28.7 (-59-80)
Ivermectin
Mean epg	1,993±1,510^a	786±1,030^b	276±281^b	523±645^b
Efficacy (CI)	-	61.8 (11-87)	87.0 (73-96)	72.5 (42-91)
Levamisole
Mean epg	2,107±1,959^a	7±18^b	64±123^b	46±90^b
Efficacy (CI)	-	99.6 (99-101)	96.9 (92-100)	97.7 (94-101)
Monepantel
Mean epg	1,988±1,389^a	143±202^b	106±156^b	103±143^b
Efficacy (CI)	-	92.7 (82-100)	94.5 (86-100)	93.0 (85-99)

Assay	Drug	EC50/Efficacy (E) Caucaia	*EC50 ISE H. contortus* isolate**	Resistance Ratio (RR)^a
EHT	Thiabendazole	EC50 = 1.02 µg/mL (0.58-3.24)^b	-	-
LDT	Ivermectin	EC50 = 1.81 ng/mL (0.35-5.62)^b	EC50 = 1.974 ng/mL (1.37-2.67)^b	0.91
LDT	Levamisole	EC50 = 0.04 µg/mL (0.035-0.057)^b	EC50 = 0.013 µg/mL (0.009-0.018)^b	3.07
FECRT	Albendazole	E = 52.4% (-15-86)^b	-	-
	Ivermectin	E = 87.0% (73-96)^b	-	-
	Levamisole	E = 99.6% (99-101)^b	-	-
	Monepantel	E = 94.5% (86-100)^b	-	-

Treatment	*H. contortus*		Trichostrongylus spp.		Oesophagostomum spp.		Total
Treatment	Larvae (n)	%	Larvae (n)	%	Larvae (n)	%	Total
No treatment	91	91.0	8	8.0	1	1.0	100
ABZ – D7	88	88.0	10	10.0	2	2.0	100
ABZ – D14	94	94.0	6	6.0	0	0.0	100
ABZ – D21	92	92.0	7	7.0	1	1.0	100
IVM – D7	89	89.0	9	9.0	2	2.0	100
IVM – D14	83	83.0	16	16.0	1	1.0	100
IVM – D21	88	88.0	12	12.0	0	0.0	100
LEV – D7	39	73.58	11	20.75	3	5.66	53^a
LEV – D14	61	78.20	17	21.79	0	0.0	78^a
LEV – D21	82	82.0	16	16.0	2	2.0	100
MPTL - D7	82	82.0	7	7.0	11	11.0	100
MPTL – D14	79	79.0	7	7.0	14	14.0	100
MPTL – D21	77	77.0	5	5.0	18	18.0	100

qPCR target	H. contortus - Caucaia		Resistance allele (%)	Resistant homozygous (%)	Proportion heterozygous at both positions (%)	ISE Isolate		Resistance allele (%)
	Ct^a ± SD of each allele					Ct^a ± SD of each allele
	Sensitive	Resistant				Sensitive	Resistant
SNP – F200Y	30.82 ± 0.63	32.31 ± 0.87	26.24	6.88	16.53	24.33 ± 0.49	30.13 ± 0.24	1.76
SNP – F167Y	29.36 ± 0.10	28.20 ± 0.70	69.08	47.72	16.53	26.02 ± 0.38	-	-
SNP – E198A	29.36 ± 0.10	-	-	-	-	23.80 ± 0.04	-	-
Hco-acr-8	29.20 ± 0.13	28.94 ± 0.42	54.37	29.56	49.61	24.63 ± 0.12	24.37 ± 0.19	38.5

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