Polimorfismos dos genes metilenotetrahidrofolato redutase, fator de crescimento transformador β1 e linfotoxina-α e susceptibilidade à artrite reumatoide

RESUMO

Antecedentes:

A artrite reumatoide é uma doença autoimune amplamente prevalente com sugerida predisposição genética.

Objetivos:

Detectar o padrão de polimorfismo dos genes metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR C677 T e A1298 C), fator de crescimento transformador β1 (TGF-β1 T869 C) e linfotoxina-α (LT-α A252G) em pacientes com artrite reumatoide e correlacionar esses padrões com a atividade da doença e os níveis séricos de fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), fator ativador de linfócitos B (BAFF) e osteopontina.

Métodos:

Foram genotipados 194 indivíduos – 90 controles e 104 com artrite reumatoide – à procura de polimorfismos dos genes MTHFR C677 T e A1298 C, TGF-β1 T869 C e LT-α A252G com uma metodologia baseada na PCR-RFLP. Mensuraram-se também os níveis séricos de TNF-α, osteopontina e BAFF com kits de Elisa.

Resultados:

O genótipo CT e o alelo T do MTHFR C677 T e o genótipo GG e alelo G do LT-α A252G estão associados ao risco de AR e a níveis mais elevados da citocina pró-inflamatória TNF-α em pacientes com artrite reumatoide.

Conclusão

Os achados do presente estudo sugerem que há associação entre os polimorfismos dos genes MTHFR C677 T e LT-α A252G e um risco aumentado de AR nessa amostra da população egípcia.

Palavras-chave:
Artrite reumatoide; Polimorfismo genético; MTHFR C677 T e A1298 C; TGF-β1 T869 C; LT-α A252G

ABSTRACT

Background:

Rheumatoid arthritis is a widely prevalent autoimmune disorder with suggested genetic predisposition.

Objectives:

The aim of this study is to detect the pattern of genetic polymorphism of methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR C677 T and A1298 C), transforming growth factor-β1 (TGF-β1 T869 C) and lymphotoxin-α (LT-α A252G) in patients having rheumatoid arthritis and correlate these patterns to disease activity and serum levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), B-Cell Activating Factor (BAFF), and osteopontin.

Methods:

A total of 194 subjects, 90 controls and 104 patients with rheumatoid arthritis were genotyped for MTHFR C677 T and A1298 C, TGF-β1 T869 C and LT-α A252G polymorphisms using a methodology based on PCR-RFLP. Also serum levels of TNF-α, osteopontin and BAFF were measured by ELISA kits.

Results:

The CT genotype and T allele of MTHFR C677 T and GG genotype and G allele of LT-α A252G are associated with the risk of RA and with higher levels of the pro-inflammatory cytokine, TNF-α in patients with rheumatoid arthritis.

Conclusion:

Our findings suggest that there is association between MTHFR C677 T and LT-α A252G genes polymorphisms and increased risk of RA in this sample of Egyptian population.

Keywords:
Rheumatoid arthritis; Gene polymorphism; MTHFR C677 T and A1298 C; TGF-β1 T869 C; LT-α A252G

Introdução

A artrite reumatoide (AR) é uma doença autoimune muito prevalente, que afeta aproximadamente 1% da população nos países desenvolvidos; as mulheres são mais frequentemente afetadas do que os homens (aproximadamente 3:1).¹ Nessa doença, as articulações são o principal alvo de ataque, com grande tendência à destruição das articulações e, consequentemente, a déficits em todos os aspectos da qualidade de vida.² As causas exatas da doença são desconhecidas, mas fatores ambientais e predisposição genética estão envolvidos. Embora esses fatores não sejam suficientes para o desenvolvimento da doença, podem desempenhar um papel na heterogeneidade do quadro clínico e na resposta ao tratamento e ser o alvo de agentes terapêuticos. Formas polimórficas do gene metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) e alguns genes de citocinas têm sido estudados como possíveis marcadores da susceptibilidade, gravidade e/ou proteção na AR.³

O C677 T (Ala 222 Val) e o A1298 C (Glu 429 Ala) são dois polimorfismos genéticos comuns do gene MTHFR. Ambos estão associados à diminuição na atividade da enzima 5, 10 metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR), com menor grau para o polimorfismo A1298 C em comparação com o C677 T.⁴ Essa enzima é responsável pela síntese de metilenotetrahidrofolato, necessária para a síntese de purina e pirimidina e regeneração da metionina a partir da homocisteína.⁵ A diminuição na atividade dessa enzima resulta em níveis elevados de homocisteína, que são comumente encontrados em pacientes com artrite reumatoide (AR) e são parcialmente responsáveis pela alta taxa de complicações cardiovasculares nesses indivíduos.⁶

O fator de crescimento transformador β1 (TGF-β1) é um fator de crescimento que regula a proliferação celular, a cicatrização de feridas e a angiogênese de um modo específico à célula.⁷ Está presente em abundância em articulações reumatoides e tem uma função anti-inflamatória, porque a sobre-expressão desse gene reduziu a artrite em um modelo animal.⁸ Indivíduos com polimorfismos nas regiões de codificação e regulação do TGF-p 1 têm uma maior propensão a desenvolver transtornos imunes. O polimorfismo TGF-β1 (T869 C) afeta os níveis séricos de TGF-β1 e é usado como marcador para o aumento no risco de doença em várias enfermidades.⁹

As citocinas desempenham um papel importante na patogênese da AR e seus processos inflamatórios associados e destruição articular. Isso ocorre principalmente por meio do desvio do equilíbrio para níveis mais elevados de citocinas pró-inflamatórias à custa de citocinas anti-inflamatórias. Assim, a concentração de membros da superfamília pro-inflamatória TNF-α está diretamente correlacionada com a patologia da doença.¹⁰ O TNF-α é uma potente citocina pró-inflamatória produzida principalmente por macrófagos. É considerado um dos principais mediadores inflamatórios da inflamação e destruição articular na AR ao induzir outras citocinas inflamatórias e estimular a expressão de moléculas de adesão pelos fibroblastos.¹¹ A linfotoxina-α (LT-α), outro membro da superfamília do TNF anteriormente conhecida como fator de necrose tumoral-β (TNF-β), induz à apoptose celular e a respostas inflamatórias após a ligação ao receptor de TNF tipos 1 e 2, respectivamente.¹² Detectou-se um polimorfismo de nucleotídeo único (A252G) no primeiro intron do gene LT-α e relatou-se que esse aumenta a expressão do nível plasmático de LT-α.¹³ Os dois alelos resultantes desse polimorfismo de nucleotídeo único são designados LT-α (10,5 kb) e LT-α (5,5 kb). O alelo LT-α (5,5 kb) está associado a níveis plasmáticos mais elevados de LT-α, malignidades linfoides e a um pior desfecho de doenças autoimunes.¹⁴

Outro membro da família TNF é o fator ativador de linfócitos B (BAFF), que pode se ligar a linfócitos B, estimular a sua proliferação e promover a sua sobrevivência e, consequentemente, ajudar na regulação da resposta imune inata e adaptativa. Observou-se uma desregulação do BAFF em pacientes com doenças autoimunes como a artrite reumatoide.¹⁵ A osteopontina (OPN) também é uma citocina pró-inflamatória que tem efeitos imunorreguladores em doenças autoimunes e pode estar envolvida na patogênese da AR.¹⁶

O objetivo deste estudo é detectar o padrão de polimorfismo do gene MTHFR dos tipos (C677 T) e (A1298 C), TGF-β1 (T869 C) e LT-α (A252G) em pacientes com artrite reumatoide egípcios e se há alguma correlação daqueles padrões com a atividade da doença e os níveis séricos de TNF-α, BAFF e osteopontina.

Amostra e métodos

Seleção da amostra

Trata-se de um estudo observacional transversal comparativo que foi feito na Unidade de Reumatologia Kasr Al Aini da Faculdade de Medicina da Universidade do Cairo, de maio a dezembro de 2013. O estudo foi feito de acordo com os princípios da Declaração de Helsinque e foi aprovado pelo comitê de ética local da Faculdade de Medicina da Universidade do Cairo.

Foi obtido um consentimento informado por escrito de todos os participantes, depois de se explicarem a finalidade e a natureza da pesquisa. Foram incluídos 104 pacientes com artrite reumatoide (16 homens e 88 mulheres) e 90 indivíduos saudáveis de idade e sexo correspondentes que atuaram como controle. Os pacientes estavam em tratamento regular com fármacos anti-inflamatórios não esteroides (Aine) (n = 42), metotrexato (n = 88), prednisona (n = 24), leflunomida (n = 32) e hidroxicloroquina (n = 56). Os pacientes eram tratados com diferentes combinações dos fármacos anteriores. Fizeram-se uma anamnese completa e exame físico de todos os pacientes e calcularam-se o escore de atividade da doença em 28 articulações (DAS-28) e a pontuação total do Health Assessment Questionnaire (HAQ).

Exames laboratoriais

Mensuraram-se os níveis séricos de BAFF, OPN e TNF-α com kits de Elisa obtidos da R&D Systems, Minneapolis, MN para os dois primeiros e da AviBion, Helsinki, Finlândia para o TNF-α, de acordo com o protocolo do fabricante.

Análise molecular

Extração de DNA

O DNA genômico foi extraído do sangue periférico com o minikit QIAamp DNA (Qiagen, Valencia, CA, EUA), de acordo com o protocolo do fabricante. A genotipagem foi feita por reação da polimerase em cadeia – polimorfismo no comprimento de fragmentos de restrição (PCR-RFLP).

Genotipagem do MTHFR A1298C¹⁷

Usou-se um conjunto de primers forward "5’-TGG CTT GGA GCT GAA GGA CTA C-3” e reverse "5’-CAC TTT GTG ACC ATT CCG GTT TG-3” para a amplificação de um fragmento de 241 pares de bases; em seguida, o fragmento amplificado foi digerido pela enzima MboII. O perfil de PCR foi: desnaturação inicial a 95 ºC durante 5 min, seguido por 35 ciclos de 30 segundos cada a 94 ºC, 51 ºC e 72 ºC, depois durante 10 min a 72 ºC. O genótipo AA produz duas bandas de 211 e 30 bp, o genótipo CC produz uma banda única de 241 bp (não dividida), e os genótipos AC produzem três bandas de 241, 211 e 30 bp.

Genotipagem do MTHFR C677T¹⁸

Usou-se um conjunto de primers forward "5’-CAT CCC TAT TGG CAG GTT AC-3” e reverse "5’-GAC GGT GCG GTG AGA GTG-3” para a amplificação de um fragmento de 198 pares de bases; em seguida, os fragmentos amplificados foram digeridos pela enzima HinfI. O perfil de PCR foi: desnaturação inicial a 94 ºC durante 5 min, seguido por 35 ciclos de 30 segundos cada a 94 ºC, 61 ºC e 72 ºC e uma extensão final a 72 ºC durante 5 min. O genótipo CC selvagem foi identificado por um fragmento único de 198 bp, o genótipo (TT) pelos fragmentos de 175/23 bp e o genótipo heterozigoto (CT) pelos fragmentos de 198, 175 e 23 bp.

Genotipagem dos genótipos TGF-β1 T869C¹⁹

Usou-se um conjunto de primers forward "5’-TTCCCTCGAGGCCCTCCTA-3” e reverse "5’-GCCGCAGCTTGGACAGGATC” para a amplificação de fragmentos de 294 bp do gene TGF-β1. Os produtos da PCR foram então digeridos pela enzima MspA1I. O perfil de PCR foi: desnaturação a 96 ºC durante 10 minutos, seguido por 35 ciclos de 75 segundos cada a 96 ºC, 62 ºC e 72 ºC, e uma extensão final a 72 ºC durante 5 min. O alelo T resultou em quatro fragmentos de 161, 67, 40 e 26 bp. O alelo C resultou em fragmentos de 149, 67, 40, 26 e 12 bp.

Genotipagem do LT-α (A252 g)²⁰

Um fragmento de 782 bp do intron 1 (+252A/G) do gene LT-α foi amplificado por PCR com um conjunto de primers: (forward) "5’-AGAGGGGTGGATGCTTGGGTTC-3” e (reverse) "5’-CCGTGCTTCGTGCTTTGGACTA-3”. Os produtos da PCR foram digeridos pela enzima de restrição NcoI. O alelo G produz um fragmento único de 782 bp (não digerido). O alelo G é digerido em bandas de 586 bp e 196 bp. O perfil de PCR foi: incubação durante 5 minutos a 95 ºC, seguido de 35 ciclos de 1 min a 95 ºC, 1 min a 52 ºC e 1 min a 72 ºC, com uma extensão final a 72 ºC durante 7 min.

Análise estatística

Usou-se o programa Statistical Package of Social Science Software (SPSS), versão 19, para analisar os dados. Os dados foram resumidos com a frequência e a percentagem para os dados qualitativos ou média e desvio padrão para os quantitativos. A análise de qui-quadrado foi usada para testar o desvio da distribuição dos genótipos do equilíbrio de Hardy-Weinberg. A comparação entre pacientes e controle saudáveis foi feita por meio do teste de qui-quadrado ou teste exato de Fisher para dados qualitativos e teste t de Student e análise de variância para os quantitativos. Usou-se a análise de regressão bivariada para detectar a associação entre as diferentes formas genéticas polimórficas e a doença. A análise da curva Receiver Operating Characteristics (ROC) foi feita para explorar a capacidade de discriminação da osteopontina e TNF em pacientes com AR. Valores de p inferiores a 0,05 foram considerados estatisticamente significativos.

Resultados

As características dos pacientes, incluindo idade, duração da doença, manifestações clínicas, atividade da doença e VHS são mostradas na tabela 1.

Tabela 1
Características dos pacientes

Parâmetros	Min	Max	Média ± DP
Idade (anos)	22,0	70,0	42,7 ± 12,1
Duração da doença (meses)	6	216	66,7 ± 52,5
Rigidez matinal (min)	3,0	120,0	29,9 ± 38,2
Número de articulações inchadas	0,0	18,0	3,3 ± 5,5
Número de articulações dolorosas	0,0	20,0	5,0 ± 5,9
VHS	5	125,0	36,4 ± 36,0
DAS-28	1,4	7,7	3,9 ± 1,6

A comparação entre os níveis séricos de osteopontina, BAFF e TNF-α (expressos como a média ± DP) em pacientes e controles mostrou que os níveis séricos de OPN e de TNF-α foram significativamente maiores nos pacientes em comparação com os controles (p < 0,001). O nível sérico de BAFF não apresentou diferença estatisticamente significativa entre pacientes e controles (p = 0,6) (tabela 2).

Tabela 2
Comparação entre os níveis séricos de osteopontina, BAFF e TNF-α (expressos como a média ± desvio padrão) em pacientes e controles

	Pacientes (n = 104) Média ± DP	Controles (n = 90) Média ± DP	p
Osteopontina (ng/mL)	12,9 ± 10,6	5,9 ± 2,5	< 0,001
BAFF (pg/mL)	474,5 ± 151,1	489,7 ± 145,6	0,6
TNF-α (pg/mL)	36,0 ± 14,3	8,9 ± 6,3	< 0,001

Ao comparar a capacidade do TNF, da osteopontina e do BAFF de discriminar os controles dos pacientes com artrite reumatoide, a curva ROC mostrou que o TNF-α tem uma maior capacidade de discriminação do que a OPN, com sensibilidade (94,2%) e especificidade (84,4%) no valor de ponto de corte de 15,2 pg/mL. Por outro lado, a OPN tem sensibilidade (71,2%) e especificidade (53,3%) no valor de ponto de corte de 5,7 ng/mL, tal como calculado pela curva ROC (fig. 1).

Figura 1
Curva ROC que mostra a capacidade de TNF, osteopontina e BAFF de discriminar os controles dos pacientes com artrite reumatoide.

Os resultados deste estudo mostraram que as frequências genotípicas de todos os casos estudados estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg para o MTHFR C677 T e A1298 C e TGF-β1 T869 C. Quanto ao LT-α A252G, as frequências genotípicas estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg somente no grupo controle.

Analisou-se a associação entre a artrite reumatoide e diferentes formas polimórficas do MTHFR C677 T, MTHFR A1298 C, TGF-β1 T869 C e LT-α A252G (tabela 3). Os resultados dessa análise mostraram uma associação estatisticamente significativa entre a artrite reumatoide e o genótipo CT, alelo T do MTHRF C677 T e genótipo GG e alelo G do LT-α A252G. Por outro lado, o genótipo AC do MTHFR A1298 C mostrou um efeito protetor para a doença, quando comparado com o genótipo AA selvagem. Além disso, não foi detectada associação estatisticamente significativa entre as diferentes formas polimórficas do polimorfismo T869 C do gene TGF-β1 e a artrite reumatoide (tabela 3).

Tabela 3
Associação entre a artrite reumatoide e diferentes formas polimórficas de MTHFR C677 T, MTHFR A1298 C, TGF-β1 T869 C e LT-α A252G

	Genótipo e alelo	Pacientes			Controles		p	OR (IC 95%)
		n	%		n	%
MTHRF C677 T	CC	46	44,2		64	71,1
	CT	50	48,1		22	24,4	0,011	3,16 (1,30-7,69)
	TT	8	7,7		4	4,4	0,260	2,78 (0,47-16,5)
	C	142	68,3		159	83,3
	T	66	31,7		30	16,7	0,028	2,18 (1,09-4,38)
MTHFR A1298 C	AA	46	44,2		20	22,2
	AC	34	32,7		56	62,2	0,006	0,26 (0,10-0,69)
	CC	24	23,1		14	15,6	0,629	0,75 (0,23-2,45)
	A	126	60,6		96	53,3
	C	82	39,4		84	46,7	0,383	0,74 (0,42-1,32)
TGF-β1 T869 C	TT	18	17,3		20	22,2
	CT	68	65,4		36	40,0	0,173	2,10 (0,72- 6,10)
	CC	18	17,3		34	37,8	0,390	0,59 (0,18-1,97)
	C	104	50%		104	58%
	T	104	50%		76	42%	0,313	0,73 (0,41-1,29)
LT-α A252G	AA	6	5,8		16	28,9
	AG	42	40,4		48	17,8	0,252	2,33 (0,55-9,95)
	GG	56	53,8		26	53,3	0,021	5,74 (1,31-25,26)
	A	54	26		80	44
	G	154	74		100	56	0,007	2,28 (1,25-4,18)

O HAQ total não apresentou qualquer associação com diferentes formas polimórficas do polimorfismo MTHFR C677 T (χ² = 5,5, p = 0,06), MTHFR A1298 C, (χ² = 2,26, p = 0,32), TGF-β1 T869 C (χ² = 1,31, p = 0,52) ou LT-α (χ² = 1,1, p = 0,57). Além disso, a atividade da doença, conforme mostrada pelo DAS-28, não esteve associada a formas polimórficas de qualquer dos genes examinados – MTHFR C677 T (χ² = 0,4 p = 0,81), MTHFR A1298 C (χ² = 0,69, p = 0,7), TGF-β1 T869 C (χ² = 4,27, p = 0,12) e LT-α (χ² = 4,54, p = 0,1).

Descobriu-se que os níveis séricos de TNF-α diferem significativamente nas diferentes formas polimórficas de todos os genes testados, com exceção do MTHFR A1298 C, como mostrado na tabela 4. O teste post hoc mostrou que o TNF-α sérico é significativamente maior no genótipo CT do que no genótipo CC do MTHFR C677 (p = 0,009), no genótipo CT do que no genótipo TT do TGF-β1 T869 C (p = 0,005), no genótipo GG quando comparado com o genótipo AA (p = 0,008) e genótipo AG (p = 0,005) do LT-α A252G. Não há diferença estatisticamente significativa nos níveis séricos de OPN e BAFF nos diferentes genótipos dos genes examinados (tabela 4).

Tabela 4
Comparação entre os níveis séricos de osteopontina, TNF-α e FABF nos diferentes genótipos em todos os casos estudados (n = 194)

	Osteopontina sérica (ng/mL)				TNF sérico (pg/mL)			BAFF sérico (pg/mL)
	Genótipo	Média ± DP	p		Média ± DP	p		Média ± DP	p
MTHFR C677 T	CC	8,32 ± 7,75	0,248		19,20± 15,076	0,031		505,16 ± 149,65	0,162
	CT	11,24 ± 9,92			28,93± 19,817			444,67 ± 133,17
	TT	11,62 ±7,91			25,62 ± 16,080			486,83 ± 197,19
MTHFR A1298 C	AA	12,27 ± 11,30	0,076		23,61 ± 16,05	0,233		486,49 ± 136,9793	0,233
	AC	7,79 ± 6,00			20,58 ± 18,17			480,98 ± 157,43
	CC	9,293 ±8,00			28,75 ± 17,85			474,47 ± 151,22
TGF-β1 T869 C	CC	6,79 ±5,99	0,151		22,17 ± 11,99	0,018		518,42 ± 164,63	0,137
	CT	10,54 ±8,66			27,09 ± 19,39			482,25 ± 139,42
	TT	10,91 ±11,07			14,04 ± 15,32			429,32 ± 139,09
LT-α A252G	AA	14,99 ± 16,98	0,075		14,43 ± 3,62	0,004		525,27 ± 174,13	0,542
	AG	9,44 ± 7,86			19,35 ± 15,45			469,87 ± 135,90
	GG	8,35 ± 5,53			29,82± 19,66			482,71 ± 155,02

Discussão

Embora a etiologia da AR permaneça pouco clara, fatores de susceptibilidade – que incluem fatores ambientais e genéticos – são evidentes. Os fatores genéticos constituem cerca de 50% desses fatores.³ As citocinas pró-inflamatórias amplificam o processo inflamatório e a destruição das articulações reumatoides. O fator de necrose tumoral, a osteopontina e o BAFF estão entre essas citocinas.³

Neste estudo, os níveis séricos de TNF-α foram significativamente mais elevados em pacientes em comparação com os controles. Os resultados referentes ao TNF-α coincidem com os resultados de estudos anteriores, como os de Gheita et al.²¹ e Ismail et al.;²² esses autores explicaram os resultados por seu papel vital e central na etiologia e patogênese da AR, daí os inibidores do TNF terem sido os primeiros fármacos biológicos antirreumáticos modificadores da doença (DMARD) a ser aprovados para o tratamento da AR. Esses medicamentos são agora parte do tratamento de rotina dos pacientes com essa doença.²³ No entanto, Ebrahimi et al.²⁴ relataram um aumento não significativo nos níveis séricos de TNF-α em pacientes quando comparados com os controles.

Além disso, nossos resultados mostraram um aumento significativo nos níveis séricos de OPN em pacientes com AR em comparação com o grupo controle saudável; isso concorda com os achados de Ji et al.²⁵ e Chen et al.,²⁶ que explicaram esses resultados pelo papel fundamental da OPN e seus receptores na patogênese da AR. Assim, vários estudos experimentais com o objetivo de usar a OPN como alvo terapêutico estão sendo feitos e os desfechos desses resultados são promissores.²⁷

Por outro lado, os níveis séricos de BAFF não mostraram diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos, o que concorda com os resultados encontrados previamente por Eldin et al.²⁸ No entanto, Mahdy et al.²⁹ e Moura et al.³⁰ relataram um aumento significativo nos níveis séricos de BAFF entre pacientes com AR, em especial naqueles com maior atividade da doença e duração da doença mais curta. Essa discrepância de resultados pode ser atribuída à diferente atividade e duração da doença no grupo estudado.

O genótipo CT e o alelo T do MTHFR C677 T estão associados à AR e a um nível sérico superior de TNF-α, mas não têm efeito significativo sobre os níveis séricos de OPN e BAFF. Por outro lado, as diferentes formas polimórficas do MTHFR A1298 C não estiveram associadas à AR ou aos níveis séricos de TNF-α, OPN ou BAFF. O genótipo AC do MTHFR A1298 C mostrou efeito protetor para a doença. Isso pode ser decorrente do maior efeito do MTHFR C677 T na enzima MTHFR, que resulta em hiper-homocisteinemia e subsequente ativação da cascata de citocinas. Os resultados de estudos prévios foram heterogêneos; alguns não mostraram associação entre o risco de AR e as diferentes formas polimórficas do MTHFR C677 T e A1298 C.^31,32 Outros relataram associação do alelo T, mas não de alguma das formas polimórficas do MTHFR C677 T com a AR.³ Rubini et al.³³ relataram uma associação entre o genótipo CC do MTHFR A1298 C, mas não de alguma das formas polimórficas do MTHFR C677 T com a suscetibilidade à AR na população italiana. Essa heterogeneidade de resultados pode ser atribuída às variações étnicas nas frequências alélicas e genotípicas, conforme relatado por Hughes et al.;³² esses autores encontraram um aumento significativo no alelo T do MTHFR C677 T e no alelo C do MTHFR A1298 C (independentemente do status de doença) em brancos quando comparados com negros americanos. Além disso, foi descrita uma interação significativa entre os polimorfismos MTHFR e fatores nutricionais/ambientais (ou seja, níveis de folato, idade, tabagismo e ingestão de álcool).⁴ O fator de crescimento transformador β1 (TGF-β1) é uma citocina anti-inflamatória associada à remissão da doença; além disso, tem o potencial de ser uma citocina pró-inflamatória. Relatou-se que polimorfismos do TGF-β1 estão associados a variações nos níveis séricos de TGF-β1 e a diversas doenças.³⁴ Neste estudo, os genótipos do TGF-β1 (T869 C) não estiveram associados à AR. No entanto, o genótipo CT esteve associado a um aumento significativo no TNF sérico quando comparado com o genótipo TT. Isso vem associado aos resultados de dois estudos de metanálise feitos por Zhang et al.³⁵ e Chang et al.,³⁶ que não mostraram associação clara do polimorfismo T869 C e alelo T do TGF-β1 com a AR em uma população mundial; contudo, foi sugerida associação apenas nas pessoas de ascendência asiática. Os resultados de Hussein et al.³⁷ foram diferentes; eles encontraram associação do alelo T do TGF-β1 com a susceptibilidade à AR em pacientes egípcios. Os resultados do presente estudo também mostraram associação do alelo G e do genótipo GG do LT-α A252G com a AR e níveis séricos mais elevados de TNF-α. Esses resultados concordam com os achados de Karray et al.³⁸ e Al-Rayes et al.,³⁹ que relataram associação entre os genótipos GG e AA com a AR, enquanto o genótipo GA foi refratário.

Do exposto, pode-se concluir que o genótipo CT do MTHFR C677 T, o genótipo AC do MTHFR A1298 C e o genótipo GG do LT-α A252G estão associados a um risco aumentado de AR em pacientes egípcios.

Que se tem conhecimento, este é o primeiro estudo a avaliar, simultaneamente, a associação entre os polimorfismos MTHFR C677 T e A1298 C, TGF-β1 T869 C e LT-α A252G com a AR e com as citocinas pró-inflamatórias TNF, BAFF e OPN em pacientes egípcios.

Este estudo apresenta algumas limitações, como a inclusão de um grupo muito amplo de pacientes quanto à duração da doença, atividade da doença e fármacos usados pelos pacientes, além de não fazer qualquer menção à positividade do fator reumatoide e anti-CCP. Os níveis de citocinas podem variar amplamente com esses fatores e também com outros detalhes metodológicos, como o tempo entre a amostra ser coletada e processada, a pontuação no DAS-28, os fármacos usados e suas doses quando as amostras são coletadas.

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Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  Sep-Oct 2016

Histórico

• Recebido
  17 Out 2015
• Aceito
  16 Mar 2016