A investigação de trabalhadores dos serviços de saúde como reservatório e disseminadores de bactérias patogênicas tem sido referida como estratégia de prevenção e controle das infecções relacionadas à assistência à saúde. Este estudo buscou avaliar a presença de Enterobacteriaceae na cavidade bucal de trabalhadores de hospital oncológico do Centro-Oeste brasileiro, bem como caracterizar o perfil fenotípico dos isolados. Foi coletada amostra de saliva de 294 trabalhadores pertencentes às equipes de saúde e de apoio. Procedimentos microbiológicos foram realizados segundo técnicas referendadas. Dentre os participantes, 55 (18,7%) estavam colonizados por Enterobacteriaceae na cavidade bucal. Foram isoladas 64 bactérias, incluindo espécies potencialmente patogênicas. A espécie mais prevalente foi Enterobacter gergoviae (17,2%). As maiores taxas de resistências foram observadas para os β-lactâmicos e 48,4% dos isolados foram considerados multirresistentes. Para as enterobactérias pesquisadas, a produção de ESBL e KPC foi negativa. Porém, dentre os 43 isolados do grupo CESP, 51,2% foram considerados produtores de β-lactamase AmpC por indução e 48,8% mutantes hiperprodutores. Considera-se a prevalência de portadores de Enterobacteriaceae significativa e o perfil fenotípico dos isolados preocupante, especialmente pela multirresistência e produção de β-lactamases AmpC.