Agua de abastecimiento público de consumo humano y oviposición de Aedes aegypti

Rev Saude Publica Revista de Saúde Pública Rev. Saúde Públ. 0034-8910 1518-8787 Faculdade de Saúde Pública da Universidade de São Paulo OBJETIVO: Analizar el efecto de la calidad de agua de reservatorios domésticos de abastecimiento público en la respuesta de oviposición por hembras de Aedes aegypti. MÉTODOS: Estudio conducido en laboratorio a partir de inmaduros de Ae. aegypti, colectados en tanques de agua del municipio de Potim, SP, Brasil, 2009. Se disponibilizaron simultáneamente tres tipos de agua por jaula para la deposición de los huevos: ovipositor (A) con agua colectada en tanque de agua de Taubaté, SP (Brasil), ovipositor (B) agua destilada (control) y ovipositor (C) con agua colectada en el tanque de agua de Potim. Se analizaron parámetros fisicoquímicos. La prueba de Kruskall-Wallis fue usada para analizar el promedio de huevos en las diferentes muestras de agua y en las comparaciones posteriores, la prueba de Dwass-Steel-Chritchlow-Flingner. El índice de actividad de oviposición fue adoptado para evaluar la respuesta en las diferentes muestras. RESULTADOS: Se observó diferencia significativa en el número de huevos entre las soluciones líquidas evaluadas (H= 45; p˂0,0001). El número de huevos en el agua de los tanques para abastecimiento público, de captación en pozos profundos (C) fue estadísticamente superior a las muestras de tanques para abastecimiento público de superficie (A) (p˂0,0001) y del Control (B) (p˂0,0001). No hubo diferencia significativa entre el número de huevos del Control (B) y el agua de superficie (A). La primera postura fue la más productiva en todas las soluciones evaluadas en las tres jaulas. La muestra de agua (C) produjo índice positivo (0,54), es decir, atractivo para oviposición. CONCLUSIONES: La calidad de agua influyó en la oviposición de Ae. aegypti. Las elevadas concentraciones de nitrógeno amoniacal en el agua de abastecimiento público sugieren que dicho componente químico fue el responsable por la atracción de hembras preñadas de Ae. aegypti para la oviposición en tales criaderos. INTRODUÇÃO O mosquito Aedes aegypti é o principal transmissor do vírus da dengue e da febre amarela urbana, importantes arboviroses que afetam o homem. As fêmeas utilizam preferencialmente recipientes artificiais para colocar seus ovos.4 Para Glasser & Gomes16 (2002) a distribuição, o aumento populacional e a densidade desse mosquito sofrem influência direta de fatores humanos e ambientais. Os criadouros artificiais podem ser aqueles abandonados pelo homem a céu aberto e os de uso doméstico para armazenamento de água, como caixas d'água, pneus, latas, vasos de flores etc. As fêmeas depositam seus ovos isoladamente nesses criadouros em substrato úmido próximo à água ou em local inundável. A seleção do local adequado para oviposição de fêmeas grávidas desse vetor é fundamental para a distribuição e o estabelecimento das populações. As atividades dos insetos são mediadas por sinais químicos que visam à reprodução, agregação e oviposição. Sua orientação em relação à fonte emissora de odor depende da composição química e física do estímulo. As fêmeas selecionam local com nutrientes necessários para o desenvolvimento das formas imaturas por meio do olfato. Esse fator é importante não somente para aumento das chances de sobrevivência de seus descendentes, mas também para emergência de grande número de adultos.3 , 5 Geier et al15 (1999) mostraram, em laboratório, a amônia como componente químico atrativo, presente no odor do hospedeiro para o mosquito Aedes aegypti. A atratividade de fêmeas de mosquitos a compostos nitrogenados foi também verificada por Sunish et al19 (2003) na oviposição do vetor da encefalite japonesa Culex tritaeniorhynchus. A quantidade de nitrogênio amoniacal na água influi fortemente na oviposição desse mosquito. Forattini & Brito12 (2003) citam a presença de elevadas concentrações de nitrogênio amoniacal nas amostras de água de caixas d'água de uso doméstico no município de Potim, SP, e sugeriram que esse componente químico pode ser responsável pela atratividade de fêmeas grávidas de Aedes aegypti para a oviposição nesses criadouros. Essa espécie apresenta capacidade em desenvolver-se não somente em águas limpas, mas também em coleções de água com diferentes níveis de poluição.2 O município de Potim, localizado no Vale Paraíba do estado de São Paulo, registra atividades de vigilância e controle de vetores da dengue e mostra que criadouros representados por caixa d'água apresentam elevada positividade e produtividade de Aedes aegypti, desde 2001.12 A manutenção dessa situação em todos esses anos sugere que esses recipientes sejam os preferidos para deposição de ovos em relação aos demais existentes e inspecionados ao longo do período.a A água desse município destinada para uso e consumo humano é oriunda de abastecimento público municipal, cuja captação se dá em lençóis subterrâneos. Os elevados níveis de infestação vetorial registrados culminaram em epidemias de dengue, cujas ações de controle permanecem sem resultados efetivos, uma vez que o criadouro em questão continua sendo o de maior positividade e produtividade desse vetor. Em Taubaté, SP, a água de abastecimento público que atende 100% da população tem captação proveniente de águas superficiais. Embora o município seja totalmente infestado pelo vetor, tem seus criadouros mais frequentes caracterizados como recipientes descartáveis e de pequeno porte, conforme dados da Superintendência de Controle de Endemias da Secretaria de Saúde do Estado de São Paulo. O presente estudo tem por objetivo analisar o efeito da qualidade da água de reservatórios domésticos de abastecimento público na resposta oviposicional de fêmeas de Ae. aegypti. MÉTODOS Amostras de populações adultas de Ae. aegypti foram obtidas a partir de larvas e pupas coletadas em reservatórios domiciliares, caixas d'água de abastecimento público dos municípios de Potim e Taubaté, estado de São Paulo, entre março e abril de 2009. Os critérios para a escolha desses reservatórios atenderam a premissas, como: facilidade de acesso, pois a visita do público iria se repetir nos dias subsequentes, e presença do responsável no domicílio em todas as inspeções, bem como garantia do poder municipal de que os dois locais escolhidos não fossem alvo das atividades de controle nesse período. Foi analisada a água de uma caixa d'água de abastecimento público do município de Potim e outra do município de Taubaté. As condições climáticas de insetário foram de temperatura controlada de 28°C (± 5%), 80% UR (± 5%) e fotofase de 14:12 (L:E). Cada unidade experimental foi composta por 50 fêmeas e 100 machos de geração F1. Indivíduos de um a três dias de vida pós-emergência foram transferidos, um a um, com o auxílio de um aspirador manual para cada uma das três gaiolas (60x60x60 cm) e alimentados diariamente com solução de mel a 10% e maçã. Camundongo swiss anestesiado foi oferecido às fêmeas por uma hora em dias alternados a partir do terceiro dia de vida dos adultos enquanto durou o experimento. Três substratos foram disponibilizados simultaneamente por gaiola para a deposição dos ovos, denominados ovipositores. Esses eram de vidro, com 12x10 cm de diâmetro e altura (e capacidade de 160 ml), revestidos internamente com papel de filtro, preenchido por 100 ml da solução líquida a ser testada: ovipositor (A) água coletada em caixa d'água de Taubaté, ovipositor (B), água destilada (controle) e ovipositor (C) água coletada em caixa d'água na cidade de Potim. O experimento foi repetido 31 vezes com duração de 24 horas cada, quando os papéis de filtro eram retirados para posterior contagem dos ovos em microscópio estereoscópico. Novos ovipositores com substrato de papel e solução líquida eram reintroduzidos nas gaiolas com alteração da posição obedecendo ao sentido horário. Amostras de água eram provenientes de caixas d'água, localizadas em área urbana, previamente determinadas para este estudo. Foram higienizadas nas suas faces internas com escova de fibra vegetal e hipoclorito de sódio a 10% e vedadas com touca plástica. A colocação da touca deu-se sob e sobre a tampa na intenção de impedir a entrada de insetos. Após duas semanas da higienização, iniciaram-se as coletas semanais de água (cinco no total). As amostras de água foram coletadas semanalmente para atender a dois procedimentos consecutivos: 1º) Realização imediata de exames para caracterização fisicoquímica das diferentes fontes de água com base nos padrões de potabilidade estabelecidos pelo Ministério da Saúde.b 2º) Utilização nos testes de atratividade para postura de ovos das fêmeas de Aedes aegypti em laboratório por uma semana. Os parâmetros fisicoquímicos eram analisados no primeiro dia da coleta de água em campo, como: aspecto, cor, cloro livre, odor, pH, sabor, turbidez, condutividade, sólidos totais dissolvidos, oxigênio dissolvido, sólidos suspensos totais, sólidos suspensos fixos, sólidos suspensos voláteis, nitrogênio amoniacal, nitrogênio nitrato, sulfato, fosfato, exames bacteriológicos para coliformes fecais e totais. Cada amostra era estocada em laboratório, diariamente analisada e utilizada nos testes ao longo da semana. Tal procedimento foi realizado para observar eventuais alterações de concentrações em alguns componentes químicos (cloro, nitrogênio amoniacal e fosfato). As análises tiveram como referencial os índices físicos e químicos, conforme Standard Methods for the Examination of Wastewater. 11 O teste de Kruskall-Wallis foi utilizado para analisar a média de ovos nas diferentes amostras de água. O teste de Dwass-Steel-Chritchlow-Flingner, softwareStatic Direct, foi adotado nas comparações posteriores entre as amostras.21 O índice de atividade de oviposição (IAO) foi adotado para avaliar a resposta de oviposição das fêmeas aos diferentes tipos de água.7 Os resultados obtidos com o IAO variaram entre -1 e +1 e puderam ser interpretados de maneira positiva ou negativa, i.e., substâncias que atraem ou estimulam a deposição de ovos produzem índices positivos, enquanto compostos que repelem ou inibem produzem índices negativos. Em que: IAO = Índice de Atividade de Oviposição, Nt = é a média do número de ovos a serem testados e Nc = é a média do número de ovos do controle. A pesquisa foi conduzida dentro dos padrões exigidos pela Declaração de Helsinque e aprovada pelo Comitê de Ética para Experimentação Animal da Universidade de Taubaté (CEEA/Unitau - Processo nº 023/08). RESULTADOS Fêmeas grávidas realizaram postura nos três tipos de água oferecidos, com diferença significativa no número de ovos entre as soluções líquidas testadas (H = 45; p < 0,0001) (Figura 1). Figura 1 Número de ovos de Aedes aegypti segundo amostras de água testadas, 2009. O número de ovos do ovipositor (C) foi superior e estatisticamente significante em relação ao do ovipositor (A) (p < 0,0001) e ovipositor (B) (p < 0,0001). Não houve diferença significante entre o número de ovos do Controle (B) e no ovipositor (A) (p = 0,9978). Foram coletados 95.299 ovos, 63,4% na amostra de água de Potim (C), 19,1% no controle (B) e 17,51% na amostra de água de Taubaté (A). A primeira postura realizada pelas fêmeas foi a mais produtiva em todas as soluções testadas nas três gaiolas. A solução líquida de Potim atingiu número médio de 7.016 ovos da soma das três réplicas (34,5%). Houve redução no número de ovos nos dias subsequentes, o que permitiu verificar curva exponencial decrescente observada até o final do experimento (Figura 2). Figura 2 Número médio diário de ovos de Aedes aegypti em água dos municípios de Potim e Taubaté, e Controle, 2009. O número de ovos foi na água do município de Potim, água do município de Taubaté e água destilada usada como controle. A amostra de água (C) produziu índice positivo (0,54), enquanto o valor foi negativo (-0,03) na amostra (A). Os resultados obtidos com o IAO indicaram que a água de Potim contém a presença de substâncias que atuam na atração de fêmeas para deposição de ovos. O teor de nitrogênio amoniacal presente nas amostras de água de abastecimento público de Potim (C) encontrava-se acima dos padrões de potabilidade, superando os valores permitidos pelo Ministério da Saúdeb (1,5 mg/l) e Decreto Estadual 12.486 (0,05 mg/l)c (Tabelas 1 e 2). Os parâmetros para cloro, nitrogênio amoniacal e fosfato foram monitorados diariamente para verificar a volatilização dessas substâncias durante sua estocagem em laboratório e sua consequente diminuição de concentração nas águas utilizadas nos testes. Os resultados mostraram alterações nos valores de concentração dos componentes mencionados; no entanto, permaneciam acima daqueles estabelecidos nas portarias citadas (Tabelas 1 e 2). Tabela 1 Resultado das análises fisicoquímicas das águas de abastecimento público. Potim, SP, coletadas em 25 e 31 de março e 8, 14 e 22 de abril de 2009. Parâmetros Data/coleta 25/3 (1ª Coleta) 31/3 (2ª Coleta) 8/4 (3ª Coleta) 14/4 (4ª Coleta) 22/4 (5ª Coleta) Aspecto Límpido Límpido Límpido Límpido Límpido Cor (PtCo APHA) 8,0 12,0 7,0 29,0 13,0 Cloro (mg/L) 0,2 0,2 0,0 0,0 0,0 Monitoramento a 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia   0,1 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 < 0,0 < 0,0 < 0,0 < 0,0 < 0,0 < 0,0 0,0 0,0 0,0 Odor NO NO NO NO NO pH 7,8 7,7 7,6 7,9 7,7 Sabor NO NO NO NO NO Turbidez NO NO NO NO NO Condutividade NO NO NO NO NO Nitrogênio amoniacal (mg/L) 1,9 1,9 1,8 1,8 2,0 Monitoramento a 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia   1,8 1,5 1,5 1,9 1,9 2,0 1,9 1,8 1,8 1,8 1,7 1,7 1,4 1,1 1,7 1,7 1,7 Nitrogênio nitrato (mg/L) 0,3 < 0.0 < 0,0 < 0,2 < 0,0 Sulfato (mg/L) < 7,0 < 7,0 < 7,0 < 7,0 < 7,0 Fosfato (mg/L) 0,8 0,8 0,8 1,0 0,7 Monitoramento a 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia   0,83 0,8 0,8 0,8 0,8 0,9 0,8 0,8 0,8 0,8 0,9 0,9 0,8 0,8 0,7 0,7 0,7 Bactérias heterotróficas UFC/ml Ausente 1 Incontáveis 411 8 Coliformes totais UFC/ml Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Coliformes fecais UFC/ml Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Sólidos totais dissolvidos NO NO NO NO NO Sólidos suspensos totais < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 Sólidos suspensos fixos < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 Sólidos suspensos voláteis < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 a Análises realizadas por espectrofotômetro HACH modelo DR/2010 (Standard Methods). Os parâmetros Cloro, Nitrogênio amoniacal e Fosfato de Potim foram monitorados diariamente para verificar a volatilização dessas substâncias e sua consequente diminuição de concentração nas águas utilizadas nos testes. Tabela 2 Resultado das análises fi sicoquímicas das águas de abastecimento público. Taubaté, SP, coletadas em 25 e 31 de março e 8, 14 e 22 de abril de 2009. Parâmetros Data/coleta 25/3 (1ª Coleta) 31/3 (2 a Coleta) 8/4 (3 a Coleta) 14/4 (4 a Coleta) 22/4 (5 a Coleta) Aspecto Límpido Límpido Límpido Límpido Límpido Cor (PtCo APHA) 6,0 4,0 4,0 2,0 6,0 Cloro (mg/L) 0,4 0,4 0,4 0,2 0,3 Monitoramento 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia   0,1 0,1 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 − − − − − − − Odor NO NO NO NO NO pH 7,5 7,4 7,5 7,6 7,4 Sabor NO NO NO NO NO Turbidez NO NO NO NO NO Condutividade NO NO NO NO NO Nitrogênio amoniacal (mg/L) < 0,0 < 0,0 < 0,0 < 0,0 < 0,0 Monitoramento 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia   0,7 0,7 0,4 0,6 0,6 0,6 0,5 0,7 0,7 0,6 0,4 <0,1 <0,1 <0,1 0,6 0,6 0,5 Nitrogênio nitrato (mg/L) 0,8 0,7 0,7 0,7 0,7 Sulfato (mg/L) 33,0 28,0 28,0 28,0 28,0 Fosfato (mg/L) 0,5 0,4 0,2 0,3 0,4 Monitoramento 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º dia 4º dia 2º dia 3º dia 4º dia 5º dia 2º dia 3º Dia 4º dia   0,5 0,4 0,4 0,3 0,3 0,3 0,3 0,2 0,2 0,2 0,3 0,3 0,3 0,3 0,4 0,3 0,2 Bactérias heterotróficas UFC/ml 497,0 680,0 560,0 411,0 Ausente Coliformes totais UFC/ml Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Coliformes fecais UFC/ml Ausente Ausente Ausente Ausente Ausente Sólidos totais dissolvidos NO NO NO NO NO Sólidos suspensos totais < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 Sólidos suspensos fixos < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 Sólidos suspensos voláteis < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 < 1,0 DISCUSSÃO O maior número de ovos de Aedes aegypti em água com elevada concentração de nitrogênio amoniacal sugere que o referido semioquímico pode ter atuado no cenário do local de oviposição como atraente e/ou estimulante. Assim, sugere-se que a água de Potim contém a presença de substâncias que atuem na atração de fêmeas para deposição de ovos. A volatilização do NH3 na água do criadouro pode ter sido o atrativo químico responsável pela orientação do voo das fêmeas grávidas por ocasião da oviposição, conforme citado por Sunish et al19 (2003). Diferentes autores assinalaram o efeito do nitrogênio na atratividade de oviposição de fêmeas de Aedes aegypti. Walker et al20 (1997) encontraram correlação positiva e significativa entre a produtividade larval de Aedes triseriatus e o nitrogênio proveniente de folhas de árvores em decomposição na água. Semelhantemente ao presente trabalho, Darriet & Corbel8 (2008), estudando propriedades atrativas e modificações fisicoquímicas da água de várias gerações de larvas de Aedes aegypti, concluíram que essa foi mais atrativa para oviposição de fêmeas grávidas do que água nunca antes colonizada. Os mesmos autores investigaram o efeito de diferentes concentrações de fertilizantes à base de nitrogênio, fósforo e potássio na oviposição de Aedes aegypti e mostraram maior atratividade às concentrações moderadas.9 Mais recentemente, os citados autores, estudando a influência de plantas em decomposição e fertilizante NPK na biologia de Aedes aegypti, concluíram que a combinação desses compostos proporcionou maior atratividade na oviposição de fêmeas grávidas dessa espécie, além de permitir o desenvolvimento de larvas do mosquito.10 As elevadas concentrações de nitrogênio amoniacal encontradas em nosso estudo podem ser atribuídas ao fato de que a água de abastecimento público de Potim provém de águas subterrâneas, poços profundos localizados entre 300 e 350 metros de profundidade em área de Formação Geológica Tremembé. Variações litológicas desse sedimento apresentam altos níveis de nitrogênio amoniacal.d Dos imóveis do município, 92% faz uso dessa água. De acordo com Alaburda & Nishihara1 (1998), a presença de compostos de nitrogênio nos seus diferentes estados de oxidação é indicativa de contaminação do aquífero e de possíveis condições sanitárias insatisfatórias. O nitrogênio participa da formação de proteínas e constitui-se num componente básico da biomassa. O nitrogênio amoniacal é componente celular fundamental e pode, em altas concentrações, propiciar condições para a proliferação excessiva de organismos, com implicações negativas para o equilíbrio do sistema aquático. Tais circunstâncias favorecem a proliferação de organismos, como microplânctons, algas e bactérias que são essenciais ao desenvolvimento larval. Esse processo pode influenciar a atratividade exercida pelo criadouro em questão. A preferência em ovipor em caixas d'água pode estar associada à forte atração coespecífica exercida e serve como estímulo à fêmea na hora de escolher o local adequado para a postura. Sunish et al19 (2003) concluíram que plantações de arroz com adubação feita a partir de compostos nitrogenados em solo alcalino favoreceram a volatilização desse composto, liberando nitrogênio amoniacal, dentre outras substâncias. Culex tritaeniorhynchusfoi mais frequente em tais plantações que naquelas em que não se utilizava esse tipo de fertilizante. Em nosso estudo, provavelmente o nitrogênio amoniacal tenha exercido o mesmo mecanismo de atratividade na oviposição de fêmeas de Aedes aegypti. Beserra et al5 (2010) observaram que fêmeas de Aedes aegypti, quando confinadas, apresentaram preferência por água de efluente de filtro anaeróbico na qual podem ovipor, desenvolver e estabelecer a sua população. Nessas condições, a coleção hídrica ora mencionada apresentava 12,1 mg/l de N-amoniacal, valores superiores ao encontrado em nosso estudo. Para este autor, Ae. aegypti não tem preferência só por água limpa; apresenta faixa de variação de qualidade de água na qual ele pode ovipor, desenvolver e estabelecer a sua população. Benzon & Apperson6 (1988) examinaram a contribuição de bactérias na oviposição de Aedes aegypti e constataram que solução suspensa de Aciniotobacter calcoaceticus, presente em águas de criadouro larval, induziu significativamente a oviposição dessa espécie. Serpa et al18 (2008) verificaram interferência positiva co-específica de água de criadouro larval na oviposição de fêmeas de Aedes aegypti em condições de laboratório. Elevado nível de nitrogênio amoniacal aliado à presença de larvas dessa espécie podem ter contribuído para tais circunstâncias. A oviposição verificada na água coletada no município de Taubaté era esperada, pois o Ae. aegypti prefere reproduzir-se em águas limpas, embora possa se adaptar às novas situações impostas.12 Beserra et al3 (2006), estudando a biologia de adultos Ae. aegypti a 26ºC, obtiveram número médio de 271,9 ovos por fêmea num período de trabalho de aproximadamente 33 dias. Tais valores são inferiores ao encontrado para Potim no presente estudo (média de 649.37 ovos/fêmea durante 31 dias). Gadelha & Toda14 (1985), numa abordagem sobre a biologia e comportamento dessa espécie de mosquito, citam que a primeira postura de uma fêmea pode atingir 80 a 100 ovos, com redução subsequente da quantidade para média de 25 a 30 ovos. Os primeiros valores citados são inferiores aos encontrados em nosso estudo (217 ovos). Por outro lado, a média diária de ovos coletados nas demais oviposições (14 ovos) apresentou-se reduzida, comparada às referidas por esses mesmos autores. Tais autores citam ainda que uma única fêmea de Aedes aegypti pode atingir de 12 a 15 posturas na vida. É muito provável que a presença do nitrogênio amoniacal tenha estimulado a oviposição, principalmente quanto à primeira postura. Gomes et al17 (2006) estudaram a determinação do padrão temporal diário de oviposição de fêmeas de Aedes aegypti em laboratório e observaram na primeira postura o maior percentual de ovos depositados em relação aos dias subsequentes. O criadouro caixa d'água de uso doméstico representa o recipiente mais frequente e o mais produtivo para Aedes aegypti no município de Potim. Em contrapartida, sua ausência foi verificada naqueles domicílios cuja caixa d'água recebe água que provém de poços rasos ou cacimbas.a Os resultados aqui encontrados reforçam a importância do monitoramento de águas subterrâneas para o abastecimento público e geram preocupações quanto à sua proteção e qualidade. Teores acima dos permitidos podem proporcionar situações indesejáveis para o organismo, além de atraírem fêmeas grávidas de Aedes aegypti para oviposição. Freitas et al13 (2001) observaram contaminação com altos índices de impotabilidade em pesquisa realizada em poços no Parque Fluminense, Corumbá, RJ. Segundo eles, a extensão do problema não é só regional, mas toma proporções nacionais. Nenhum outro componente químico diferiu dos padrões de potabilidade adotado e, em conformidade com a literatura,2 , 8 - 10 , 12 , 15 ,22 a discussão foi direcionada para a diferença na concentração de nitrogênio amoniacal encontrada entre as amostras. Constituíram limitação metodológica estudos de soluções puras dessa substância em gradientes de concentrações conhecidas para avaliar, inclusive, possível efeito dose-dependente, livre de outros compostos que possam atuar como estimulante na seleção de criadouros para oviposição. As concentrações de nitrogênio amoniacal encontradas nas águas de abastecimento público de Potim podem ter contribuído na escolha da coleção hídrica para oviposição desse mosquito. Torna-se importante melhorar a qualidade dessa água com vistas não só à diminuição da infestação do mosquito e consequente risco de transmissão de dengue, mas também para a saúde da população em questão. REFERÊNCIAS 1 1. Alaburda J, Nishihara L. Presença de compostos de nitrogênio em águas de poços. Rev Saude Publica. 1998;32(2):160-5. DOI:10.1590/S0034-89101998000200009 Alaburda J Nishihara L Presença de compostos de nitrogênio em águas de poços Rev Saude Publica 1998 32 2 160 165 10.1590/S0034-89101998000200009 2 2. Allan AS, Kline DL. Evaluation of organic infusions and synthetic compounds mediating oviposition in Aedes albopictus and Aedes aegypti (Diptera: Culicidae). J Chem Ecol. 1995;21(11):1847-60. 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Taubaté; 2011. b Ministério da Saúde. Portaria nº 518, de 25 de março de 2004. Estabelece os procedimentos e responsabilidades relativos ao controle e vigilância da qualidade da água para consumo humano e seu padrão de potabilidade, e dá outras providências. Brasília (DF); 2005 [citado 2013 jul 16]. Disponível em: http://portal.saude.gov.br/portal/arquivos/pdf/portaria_518_2004.pdf c São Paulo (Estado). Decreto Estadual nº 12.486, de 20 de outubro de 1978. Norma Técnica Alimentar - NTA 60. Águas de consumo alimentar. São Paulo; 1978 [citado 2013 jul 16]. Disponível em: http://www.labnacional.com.br/sites/all/themes/danland/legislacao/NTA60.pdf d Instituto Pesquisa Tecnológica. Estudo das águas subterrâneas e elaboração da Carta Geotécnica do Município de Potim: relatório. São Paulo;1998. Public drinking water supply and egg laying by Aedes aegypti The authors declare that there are no conflicts of interest. OBJECTIVE: To evaluate the effect of the quality of publicly supplied water in domestic water tanks on egg laying by female Aedes aegypti. METHODS: Laboratory study on immature Ae. aegypti, collected from water-tanks in the municipality of Potim, SP, Southeastern Brazil. Each cage contained three types of water in which eggs could be laid: Three choice per test were simultaneously used to deposit the eggs, ovipositor (A) with water collected from a water tank in Taubaté, ovipositor (B) with distilled water (control) and ovipositor (C) water collected from a water tank in the municipality of Potim. Physiochemical parameters were analyzed. The Kruskall-Wallis test was used to analyze the mean number of eggs in each water sample and the Dwass-Steel-Critchlow-Fligner test was used in making comparisons. To evaluate egg laying, an ovipositional activity index was adopted. RESULTS: A significant difference in the number of eggs was found between the liquid solutions tested (H = 45; p < 0.0001). The number of eggs found in water tank samples originating from deep wells (C), was statistically superior to water samples from water tanks originating from superficial wells (A) (p < 0.0001) and from the Control (C) p < 0.0001. There was no significant difference between the number of eggs in Control (B) and the surface water (A). In all three tests, the first position was the most productive in all tested solutions. Only water sample (C) produced a positive index (0.54), i.e., attractive to egg laying. CONCLUSIONS: Water quality influences egg laying by Aedes aegypti. The high concentrations of ammonium nitrate in public water supplies suggest that this chemical component was responsible for attracting pregnant female Aedes aegyptito lay eggs in these environments. Aedes, growth & development Water Physicochemical Characteristics Surface Waters Groundwater Water Supply INTRODUCTION The Aedes aegypti mosquito is the principal carrier of the dengue virus and urban yellow fever, significant arboviruses which affect humans. The females prefer to use artificial containers to lay their eggs.4 For Glasser & Gomes16 (2002) the distribution, population increase and density of this mosquito is directly influenced by human and environmental factors. The artificial breeding sites can be those abandoned in the open air as well as those used for storing water for domestic use, such as water tanks, tires, cans, vases etc. The females lay their eggs in these sites, in moist substratum close to water or in areas prone to flooding. The selection of suitable locations to lay eggs by pregnant females is fundamental to the distribution and establishment of these populations. The insects' reproduction, aggregation and egg laying activities are governed by chemical signals. They are guided towards the source of the odor depending on the chemical and physical composition of the stimulus. Females use their sense of smell to select a location with the nutrients necessary for the development of the offspring. This factor is important, not just in increasing the chances of survival, but also in guaranteeing the emergence of a large number of adults.3 , 5 Geier et al15 (1999) showed in a laboratory, that ammonium nitrate is a chemical component which attracts the Aedes aegypti mosquito to their host. That females are attracted to nitrogenous compounds, was also verified by Sunish et al19 (2003) in egg laying by the Japanese encephalitis vector Culex tritaeniorhynchus. The quantity of ammonium nitrate in the water strongly influences the egg laying of this mosquito. Forattini & Brito12 (2003) cited the presence of high concentrations of nitrogen in samples of water from water tanks for domestic use in the municipality of Potim, SP, Southeastern Brazil, and suggested that this chemical component may be responsible for attracting pregnant female Aedes aegypti to lay their eggs in these containers. This species has shown it capacity to develop not only in clean water, but also in water with different levels of pollution.2 The municipality of Potim, located in the Vale do Paraíba area of the state of São Paulo, has been the subject of monitoring and control activities for dengue, showing that breeding sites in the form of water tanks have high levels of Aedes aegypti activity, since 2001.12 That this situation has remained unchanged in all these years suggests that these receptacles are preferred for egg laying when compared with other possible sites inspected throughout the period.a The drinking water in this municipality originates from the public water supply, the catchment of which is from the water table. The high levels of mosquito infestation culminated in dengue epidemics, for which control actions remain ineffective, as the breeding sites in question continue to be those most productive and positive for this mosquito. In Taubaté, SP, Southeastern Brazil, the catchment of the public water supply, which serves 100% of the population, originates in surface water. Although the municipality is completely infested by the mosquito, the most common breeding sites are characterized as small, disposable receptacles, according to data from the state of São Paulo, Department of Health of the Superintendência de Controle de Endemias, (Superintendence of Control of Endemic Diseases). This study aimed to analyze the effect of the water quality in domestic publicly supplied water in domestic water tanks on egg laying by female Ae. aegypti. METHODS Samples of adult populations of Ae. aegypti were obtained from larvae and pupae collected in domestic containers, water tanks storing publicly supplied water in the municipalities of Potim and Taubaté, São Paulo state, between March and April 2009. The criteria for choosing these containers was based on the premises of: easy access as the visit would be repeated on subsequent days, and the presence of the head of the household at all inspections, as well a guarantee by the municipality that there two locations chosen were not the subject of any control measures in this period. The water in one water container storing publicly supplied water from Potim, and another from Taubaté was analyzed. The insectarium had a controlled temperature of 28ºC (± 5%), 80% RH (± 5%) and photophase of 14:12 (L:D). Each experimental unit was composed of 50 females F1. Individuals aged one to three days post-emergence were transferred, one by one, with the help of a handheld vacuum, to one of three cages (60x60x60 cm) and were fed daily with a solution of 10% honey and apple. Females aged three days and over were provided with an anesthetized mouse for one hour a day, alternate days, for the duration of the experiment. Three substrata were available, simultaneously, in the cage for the purpose of laying eggs, denominated ovipositors. These were made of glass, 12x10 cm in diameter and height (and capacity of 160 ml), lined with filter paper, filled with 100 ml of the liquid to be tested: ovipositor (A) water collected from a water tank in Taubaté, ovipositor (B), distilled water (control) and ovipositor (C), water from a water tank in Potim. The experiment was repeated 31 times, each time lasting 24 hours, after which the filter paper was removed and the eggs counted using a stereoscopic microscope. New ovipositors, with paper substrata and liquid solution were reintroduced into the cages and their position rotated in a clockwise direction. The water samples were form water tanks, located in urban areas, previously determined by this study. Their interiors were cleaned with a vegetable fiber brush and a solution of 10% Sodium hypochlorite and sealed with a plastic cap. The plastic cap was placed over the lid with the aim of preventing insects getting in. Two weeks after this process, weekly water collections began (five in total). The water samples were collected weekly to fulfill two consecutive procedures: 1º) Immediate completion of tests for physicochemical characterization of different water sources based on the standards for drinking water established by the Ministry of the Health.b 2º) Used to test their attractiveness to egg-laying Aedes aegyptifemales in the laboratory for a week. The physicochemical parameters were analyzed on the first day the water was collected in the field, assessing: appearance, color, presence of chlorine, smell, pH, taste, clarity, conductivity, total dissolved solids, dissolved oxygen, total suspended solids, fixed suspended solids, volatile suspended solids, ammonium nitrate, nitrate, sulfate, phosphate, bacteriological tests for total and fecal coliforms. Each sample was stored in the laboratory, analyzed daily and used in tests throughout the week. This procedure was used to observe eventual alterations in concentrations of some chemical components (chlorine, ammonium nitrate and phosphate). The analyses used the physical and chemical indices according to the Standard Methods for the Examination of Wastewater as a reference.11 The Kruskall-Wallis test was used to analyze the mean number of eggs in the different water samples. The Dwass-Steel-Chritchlow-Flingner test, using Static Direct software, was adopted in making comparisons between samples.21 The Egg Laying Activity Index (EAI) was adopted to evaluate the egg laying response of the females to the different types of water.7 The results obtained from the EAI varied between -1 and +1 and can be interpreted in a positive or negative manner, i.e., substances which attract or stimulate the laying of eggs produce positive indices, whereas components which repel or inhibit produce negative indices. In which: EAI = Egg Laying Activity Index, Nt = mean number of eggs to be tested and, Nc = is the mean number of eggs in the control. The research was carried out according to the standards required by the Helsinki Declaration and approved by the Ethics Committee for Animal Experimentation of the Universidade de Taubaté (CEEA/Unitau - Process nº 023/08). RESULTS Pregnant females laid eggs in the three types of water available, with a significant difference between the number of eggs in the solutions tested (H = 45; p < 0.0001) (Figure 1). Figure 1 Number of Aedes aegypti eggs according to samples of the water tested, 2009. The number of eggs in ovipositor (C) was higher and statistically significant in relation to ovipositor (A) (p < 0.0001) and ovipositor (B) (p < 0.0001). There was no significant difference between the number of eggs in the control (B) and in ovipositor (A) (p = 0.9978). A total of 95,299 eggs were collected, 64.4% in the sample of water from Potim (C), 19.1% from the control (B) and 17.51% form the sample of water from Taubaté (A). The first laying was the most productive in all of the solutions tested in the three cages. The liquid solution from Potim had a mean number of 7,016 eggs from the sum of the three replications (34.5%). There was a decrease in the number of eggs on the subsequent days, which allowed a decreasing exponential curve until the end of the experiment to be verified (Figure 2). Figure 2 Mean daily number of Aedes aegypti eggs in the municipalities of Potim and Taubaté, Southeastern Brazil, and the Control, 2009. The number of eggs was in the water from the municipality of Potim, water from the municipality of Taubaté and distilled water used as the control. Sample (C) produced a positive index (0.54), whereas the value was negative (-0.03) in sample (A). The results obtained from the EAI indicated that the water from Potim contained the presence of substances which acted to attract females to lay their eggs. The ammonium nitrate content present in the samples of publicly supplied water in Potim (C) were found to be above acceptable standards for drinking water, exceeding the values permitted by the Ministry of the Healthb(1.5 mg/l) and State Decree 12,486 (0.05 mg/l)c (Tables 1 and 2). The parameters for chlorine, ammonium nitrate and phosphate were monitored daily to verify their volatization during storage in the laboratory and their consequent decrease in concentration in the water used in the tests. The results show alteration in the values for concentrations of these components; however, they remained above the levels established in the abovementioned directives (Tables 1 and 2). Table 1 Results of the physicochemical analysis of samples from the public water supply. Potim, SP, Southeastern Brazil, collected 25th and 31st March and 8th, 14th and 22nd April 2009. Parameters Data/collection March, 25 (1 st Collection) March, 31 (2 nd Collection) April, 8 (3 rd Collection) April, 14 (4 th Collection) April, 22 (5 th Collection) Appearance Clear Clear Clear Clear Clear Color (PtCo APHA) 8.0 12.0 7.0 29.0 13.0 Chlorine (mg/L) 0.2 0.2 0.0 0.0 0.0 Monitoring a 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day   0.1 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 < 0.0 < 0.0 < 0.0 < 0.0 < 0.0 < 0.0 0.0 0.0 0.0 Odor NO NO NO NO NO pH 7.8 7.7 7.6 7.9 7.7 Taste NO NO NO NO NO Clarity NO NO NO NO NO Conductivity NO NO NO NO NO Ammonium nitrate (mg/L) 1,9 1,9 1,8 1,8 2,0 Monitoring a 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day   1.8 1.5 1.5 1.9 1.9 2.0 1.9 1.8 1.8 1.8 1.7 1.7 1.4 1.1 1.7 1.7 1.7 Nitrogen Nitrate (mg/L) 0.3 < 0.0 < 0.0 < 0.2 < 0.0 Sulfate (mg/L) < 7.0 < 7.0 < 7.0 < 7.0 < 7.0 Phosphate (mg/L) 0.8 0.8 0.8 1.0 0.7 Monitoring a 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day   0.83 0.8 0.8 0.8 0.8 0.9 0.8 0.8 0.8 0.8 0.9 0.9 0.8 0.8 0.7 0.7 0.7 Heterotrophic bacteria UFC/ml Absent 1 Uncountable 411 8 Col. total UFC/ml Absent Absent Absent Absent Absent Col. fecal UFC/ml Absent Absent Absent Absent Absent Total dissolved solids NO NO NO NO NO Total suspended solids < 1.0 < 1.0 < 1.0 < 1.0 < 1.0 Total fixed solids < 1.0 < 1.0 < 1.0 < 1.0 < 1.0 Volatile suspended solids < 1.0 < 1.0 < 1.0 < 1.0 < 1.0 a Analyses performed by HACH spectrophotometer model DR/2010 (Standard Methods). Parameters for chlorine, Ammonium Nitrate and Phosphate in Potim were monitored daily to verify the volatilization of these substances and the consequent decrease in the concentration in water used in the tests. Table 2 Results of the physicochemical analysis of samples from the public water supply. Taubaté, SP, Southeastern Brazil, collected on 25th and 31st of March and 8th, 14th and 22nd April 2009. Parameters Data/collection March, 25 (1 st collection) March, 31 (2 nd collection) April, 8 (3 rd collection) April, 14 (4 th collection) April, 22 (5 th collection) Appearance Clear Clear Clear Clear Clear Color (PtCo APHA) 6.0 4.0 4.0 2.0 6.0 Chloride (mg/L) 0.4 0.4 0.4 0.2 0.3 Monitoring 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day   0.1 0.1 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 − − − − − − − Odor NO NO NO NO NO pH 7.5 7.4 7.5 7.6 7.4 Taste NO NO NO NO NO Clarity NO NO NO NO NO Conductivity NO NO NO NO NO Ammonium nitrate (mg/L) < 0.0 < 0.0 < 0.0 < 0.0 < 0.0 Monitoring 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day   0.7 0.7 0.4 0.6 0.6 0.6 0.5 0.7 0.7 0.6 0.4 <0.1 <0.1 <0.1 0.6 0,6 0,5 Nitrogen nitrate (mg/L) 0.8 0.7 0.7 0.7 0.7 Sulfate (mg/L) 33.0 28.0 28.0 28.0 28.0 Phosphate (mg/L) 0.5 0.4 0.2 0.3 0.4 Monitoring 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day 5 th day 2 nd day 3 rd day 4 th day   0.5 0.4 0.4 0.3 0.3 0.3 0.3 0.2 0.2 0.2 0.3 0.3 0.3 0.3 0.4 0,3 0,2 Heterotrophic bacteria UFC/ml 497.00 680.00 560.00 411 NO Col. total UFC/ml Absent Absent Absent Absent Absent Col. fecal UFC/ml Absent Absent Absent Absent Absent Total dissolved solids < 1.00 < 1.00 < 1.00 < 1.00 < 1.00 Total suspended solids < 1.00 < 1.00 < 1.00 < 1.00 < 1.00 Total fixed solids < 1.00 < 1.00 < 1.00 < 1.00 < 1.00 Volatile suspended solids < 1.00 < 1.00 < 1.00 < 1.00 < 1.00 DISCUSSION The higher number of Aedes aegypti eggs in water with high concentrations of ammonium nitrate suggests that this semiochemical may act as an attractant or stimulate at the scene of egg laying. This suggests that the water in Potim contains the presence of substances which attract females to lay eggs. The volatilization of NH3 in the water at the breeding site may have been the chemical attraction responsible for guiding the flight of the pregnant females, as cited by Sunish et al19 (2003). Different authors have indicated the effect of nitrogen in attracting female Aedes aegypti to lay eggs. Walker et al20 (1997) found a positive, significant correlation between the larval productivity of Aedes triseriatus and the nitrogen coming from decomposing tree leaves in the water. Similarly to this study, Darriet & Corbel8 (2008), studying properties of attraction and physicochemical changes in the water by various generations of Aedes aegypti larvae, concluded that this was more attractive to pregnant females than water which had never been colonized. The same authors investigated the effect of different concentrations of nitrogen, phosphorous and potassium based fertilizers on Aedes aegypti egg laying and showed that moderate levels were the most attractive.9 More recently, the abovementioned authors, studying the influence of decomposing plants and NPK fertilizer on Aedes aegypti biology, concluded that the combination of these components was the most attractive to egg laying females of this species, as well as allowing the mosquito larvae to develop.10 The high levels of ammonium nitrate found in this study may be due to the fact that the public water supply in Potim comes from the water table, at shallow depths of 300 and 350 meters underground in the Tremembé Geological Formation. Lithologic variations of this sediment have high levels of ammonium nitrate.d Of the residences in the municipality, 92% use this water. According to Alaburda & Nishihara1 (1998), the presence of nitrogen compounds at different stages of oxidization is indicative of groundwater contamination and possible unsatisfactory sanitary conditions. Nitrogen participates in the formation of proteins and is a basic component of Biomass. Ammonium nitrate is an essential cellular component and may, in high concentrations, provide conditions for the excessive proliferation of organisms, with negative implications for the balance of the aquatic system. Such circumstances favor the proliferation of organisms such as micro plankton, algae and bacteria, essential to larval development. This process may influence the attraction exercised by the breeding site in question. The preference for laying eggs in water tanks may be associated with the strong, co-specific attraction exercised and serve to stimulate the female at the time of choosing an appropriate site for laying her eggs. Sunish et al19 (2003) concluded that rice plantations fertilized using nitrogen based compounds in alkali soils favor the volatization of these compounds, releasing ammonium nitrate and other substances. Culex tritaeniorhynchus was more common in such plantations than in those which did not use this type of fertilizer. In this study, it is probable that ammonium nitrate carried out the same mechanism in attracting the Aedes aegypti females to lay eggs. Beserra et al5 (2010) observed that female Aedes aegypti, when confined, prefer anaerobically filtered effluent water to lay their eggs, develop and establish the population. In these conditions, hydro collection had 12.1 mg/l of ammonium nitrate -N, values higher than those found in this study. In the opinion of this author, Ae. aegypti do not prefer only clean water; there is variation in the water quality in which it can lay eggs and develop and establish the population. Benzon & Apperson6 (1988) examined the contribution of bacteria in Aedes aegypti egg laying and stated that a suspended solution of Aciniotobacter calcoaceticus, present in water in larval breeding sites, significantly induced this species to lay eggs. Serpa et al18 (2008) verified co-specific positive interference of water in larval breeding sites on female Aedes aegypti egg laying in laboratory conditions. High ammonium nitrate levels, allied to the presence of larvae of this species may have contributed to such circumstances. The egg laying found in the water collected in the municipality of Taubaté was expected, as Ae. aegypti prefer to reproduce in clean water, although they can adapt to new situations which arise.12 Beserra et al3 (2006), studying the biology of adult Ae. aegypti at obtained a mean number of 271.9 eggs per female over a period of approximately 33 days. Such values are lower than those found in Potim in this study (mean 649.37 eggs/female over 31 days). Gadelha & Toda14 (1985), in an approach on the biology and behavior of this species of mosquito cited that the first egg laying may reach 80 to 100 eggs, with a subsequent decrease in quantity to a mean 25 to 30 eggs. The former values are also inferior to those found in this study (217 eggs). On the other hand, the daily mean of eggs collected in the other ovipositors (14 eggs) was lower, compared with those reported by the same authors. These authors also cite that one single Aedes aegypti female can lay 12 to 15 times in her lifecycle. It is highly probable that the presence of ammonium nitrate stimulated egg laying, especially with regards to the first laying. Gomes et al17 (2006) studied determination of daily patterns in female Aedes aegypti egg laying in the laboratory and observed that the highest percentage of eggs were deposited in the first laying compared with subsequent days. The domestic water tank breeding site is the most commonly used and most productive container for Aedes aegypti in the municipality of Potim. Conversely, their absence was verified in those residences whose water tank was replenished from shallow wells or ponds.a The results found here reinforce the importance of monitoring the water table used in the public water supply and produces concerns as to its protection and quality. Levels above those permitted may lead to unwanted situations for the organism, as well as attracting pregnant female Aedes aegypti to lay their eggs. Freitas et al13 (2001) observed contamination, and high rates of water not fit for drinking in research carried out in the Parque Fluminense, Corumbá, RJ, Southeastern Brazil. According to them the extent of the problem is not just regional but takes on national proportions. No other chemical component differed from the standards adopted for drinking water and, according to the literature, 2 , 8 - 10 , 12 , 15 ,22 the discussion was aimed at differences in the concentration of ammonium nitrate found in the samples. Using pure solutions of this compound in known gradients of concentration to evaluate possible dose dependent effect, without including other compounds which may act as a stimulant in selecting sites to lay eggs is a methodological limitation of studies. The concentrations of ammonium nitrate found in the public water supply in Potim may have contributed to the choice of the mosquito to lay eggs here. It is, therefore, important to improve the quality of this water, not only in order to reduce the mosquito infestation and consequent risk of transmitting dengue, but also for the health of the population in question. a Secretaria de Saúde do Estado de São Paulo, Superintendência de Controle de Endemias, Serviço Regional de Taubaté. Relatório técnico. Taubaté; 2011. b Ministério da Saúde. Portaria nº 518, de 25 de março de 2004. Estabelece os procedimentos e responsabilidades relativos ao controle e vigilância da qualidade da água para consumo humano e seu padrão de potabilidade, e dá outras providências. Brasília (DF); 2005 [cited 2013 Jul 16]. Available from: http://portal.saude.gov.br/portal/arquivos/pdf/portaria_518_2004.pdf c São Paulo (Estado). Decreto Estadual nº 12.486, de 20 de outubro de 1978. Norma Técnica Alimentar - NTA 60. Águas de consumo alimentar. São Paulo; 1978 [cited 2013 Jul 16]. Available from: http://www.labnacional.com.br/sites/all/themes/danland/legislacao/NTA60.pdf d Instituto Pesquisa Tecnológica. Estudo das águas subterrâneas e elaboração da Carta Geotécnica do Município de Potim: relatório. São Paulo;1998.