Sesquiterpenos de Ocotea lancifolia (Lauraceae)

Sesquiterpenes of Ocotea lancifolia (Lauraceae)

Ocotea lancifolia (Lauraceae); sesquiterpenes; eremophilane

ARTIGO

Sesquiterpenos de Ocotea lancifolia (Lauraceae)

Sesquiterpenes of Ocotea lancifolia (Lauraceae)

Maria José de Camargo; Mayker Lazaro Dantas Miranda; Camila Miyuki Kagamida; Edilene Delphino Rodrigues; Fernanda Rodrigues Garcez; Walmir Silva Garcez^*

Centro de Ciências Exatas e Tecnologia, Química, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, 79070-900 Campo Grande - MS, Brasil

ABSTRACT

Six new eremophilane sesquiterpenes, (rel)-4β,5β,7β-eremophil-9-en-12-oic acid (1), (rel)-4β,5β,7β-eremophil-1(10)-en-12-oic acid (2), (rel)-4β,5β,7β-eremophil-1(10)-en-2-oxo-12-oic acid (3), (rel)-4β,5β,7β-eremophil-9-en-12,8α-olide (4), (rel)-4β,5β,7β-eremophil-9-en-12,8β-olide (5) and (rel)-4β,5β,7β-eremophil-9α,10α-epoxy-12-oic acid (6), were isolated from the leaves of a specimen of Ocotea lancifolia (Lauraceae). Two other known sesquiterpenes, 4β,5β,7β-eremophil-11-en- 10α-ol (7) reported for the first time in the genus Ocotea, and the aromadendrene sesquiterpene, spathulenol (8), were also isolated. Their structures were determined on the basis of spectral data (MS, IR, UV and NMR-1D and 2D) and subsequent comparisons with the literature.

Keywords:Ocotea lancifolia (Lauraceae); sesquiterpenes; eremophilane.

INTRODUÇÃO

Ocotea lancifolia Lauraceae é uma espécie popularmente conhecida por canela pilosa que ocorre no "Pantanal" e "Cerrado" de Mato Grosso do Sul, principalmente em matas ciliares ou em áreas próximas a regiões alagadas.¹ Em plantas do gênero Ocotea foram caracterizados metabólitos secundários das seguintes classes: alcaloides aporfínicos e benziltetraidroisoquinolínicos, lignanas e neolignanas, benzopiranos, monoterpenos, sesquiterpenos e fenilpropanoides.² Muitas espécies deste gênero são empregadas na medicina popular, sendo a elas atribuídas propriedades anti-reumáticas, depurativas, tônicas, estomáquicas e contra abcessos.³

No Paraguai, O. lancifolia é usada na medicina popular como "antiparasita" e há uma única descrição na literatura de estudos fitoquímicos do extrato alcaloídico desta planta coletada naquele país. Neste estudo foram isolados treze alcaloides, tendo sido também avaliadas as atividades destes in vitro contra a forma promastigota de Leishmania amazonensis e Trypanosoma cruzi.⁴

O presente trabalho aborda o estudo fitoquímico das folhas de um espécime de O. lancifolia coletado em Mato Grosso do Sul, o qual levou ao isolamento de oito sesquiterpenos, sendo seis deles inéditos.

PARTE EXPERIMENTAL

Instrumentação e procedimentos gerais

Para as técnicas de cromatografia em coluna foram utilizadas como fases estacionárias gel de sílica 70-230 mesh e 230-400 mesh e Sephadex LH-20. As análises por cromatografia em camada fina foram realizadas utilizando-se sílica gel 60 GF₂₅₄ e cromatofolhas de alumínio 60 F₂₅₄ da Merck. Como reveladores foram utilizados Sulfato de Cério [Ce(SO₄)₂] - solução a 2% em H₂SO₄ e luz UV₂₅₄. Os espectros de RMN foram obtidos em espectrômetro Bruker^® DPX-300 (300/75MHz) e como solvente foi utilizado CDCl₃, de procedência CIL^® (Cambridge Isotope Laboratories, Inc). Os espectros de massas de baixa resolução foram obtidos por impacto de elétrons a 70 eV e foram adquiridos em espectrômetro CG-EM - QP2010 PLUS SHIMADZU^®, sendo a inserção das amostras realizada de modo hifenado. Os espectros de absorção na região do ultravioleta foram obtidos em espectrofotômetro modelo U-3000 da marca Hitachi, utilizando-se clorofórmio como solvente. As medidas de rotação óptica foram determinadas em polarímetro Perkin-Elmer 341. Os espectros de IV foram registrados em espectrômetro Bomem-Hartmann & Braun FT, tendo sido as amostras dissolvidas em CHCl₃ e preparadas sob a forma de filme.

Material vegetal

O material vegetal foi coletado pelo Prof. Dr. Walmir Silva Garcez (UFMS) em setembro de 2006, na região do Rio Guariroba no município de Campo Grande - Mato Grosso do Sul. A identificação da planta foi realizada pelo Dr. Flávio Macedo Alves, sendo uma exsicata (WG 206) incorporada no Herbário-CGMS, da UFMS.

Extração e isolamento das substâncias

As folhas (3 kg) foram secas, trituradas e extraídas exaustivamente com etanol à temperatura ambiente. As soluções resultantes após filtrações foram concentradas sob pressão reduzida, obtendo-se o extrato etanólico bruto das folhas (486 g). Este foi submetido à partição entre metanol/água (9:1) e hexano, originando, após evaporação dos solventes, os resíduos hexânico e hidrometanólico. Parte do resíduo hexânico (25 g) foi submetida a uma filtração em coluna de gel de sílica 70-230 mesh, eluída inicialmente com hexano e posteriormente com misturas de hexano/AcOEt e AcOEt/metanol em gradiente crescente de polaridade, sendo coletadas 16 frações. A fração OLH-4 (Hex/AcOEt 95:5, 150 mg), proveniente da coluna filtrante, foi cromatografada em coluna de gel de sílica 230-400 mesh, utilizando como eluente misturas de hexano e AcOEt em gradiente crescente de polaridade. Este procedimento resultou na obtenção dos compostos 1 (ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofil-9-en-12-oico, 4,6 mg) e 2 (ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofil-1(10)-en-12-oico, 8,2 mg). O estudo da fração OLH-5 (Hex/AcOEt 9:1, 100 mg), através dos mesmos procedimentos descritos acima, levou ao isolamento do composto 3 (ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofil-1(10)-en-2-oxo-12-oico, 14,4 mg). Os compostos 4 ((rel)-4β,5β,7β-eremofil-9-en-12,8α-olido, 12,4 mg) e 5 ((rel)-4β,5β,7β-eremofil-9-en-12,8β-olido, 4,5 mg) foram obtidos da fração OLH-6 (Hex/AcOEt 8:2, 200 mg), após cromatografia em coluna de gel de sílica 230-400 mesh, utilizando como solvente hexano/AcOEt (9:1) em modo isocrático. A fração OLH-8 (Hex/AcOEt 7:3, 200 mg) foi fracionada também em gel de sílica 230-400 mesh, utilizando os solventes hexano e AcOEt em gradiente crescente de polaridade, levando ao isolamento do composto 6 (ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofilan-9α,10α-epóxi-12-oico, 3,1 mg). O fracionamento da fração OLH-3 (hexano, 200 mg) em gel de sílica 230-400 mesh, utilizando misturas de hexano e AcOEt em gradiente crescente de polaridade, resultou no isolamento dos compostos 7 (4β,5β,7β-eremofil-11-en-10α-ol, 19,4 mg) e 8 (espatulenol, 12,4 mg).

Ácido (rel)-4b,5b,7b-eremofil-9-en-12-oico (1): Óleo incolor, [α]_D²³ + 8,5 (CHCl₃; c. 0,88). IV (filme) ν_máx cm^-1: 3440; 2931; 1708 e 1199. EM (70 eV) m/z (intensidade relativa): 236 (18) (M^+·), 162 (100), 147 (62), 135 (40), 107 (90), 91 (70). RMN de ¹H e ¹³C: Tabela 1.

Ácido (rel)-4b,5b,7b-eremofil-1(10)-en-12-oico (2): Óleo incolor, [α]_D²³ + 3,6 (CHCl₃; c. 0,48). EM (70 eV) m/z (intensidade relativa): 236 (22) (M^+·), 162 (100), 177 (10), 147 (80), 120 (50), 91 (60). RMN de ¹H e ¹³C: Tabela 1.

Ácido (rel)-4b,5b,7b-eremofil-1(10)-en-2-oxo-12-oico (3): Óleo incolor, [α]_D²³ - 4,7 (CHCl₃; c. 0,18). IV (filme) ν_máx cm^-1: 3448; 2958; 2935; 1704; 1654; 1458 e 1199. EM (70 eV) m/z (intensidade relativa): 250 (20) (M^+·), 147 (100), 235 (15), 162 (50), 120 (40), 55 (20). RMN de ¹H e ¹³C: Tabela 1.

(rel)-4b,5b,7b-Eremofil-9-en-12,8a-olido (4): Óleo incolor, [α]_D²³ + 5,6 (CHCl₃; c. 0,17). IV (filme) ν_máx cm^-1: 2920; 2850; 1770; 1731; 1454 e 1377. EM (70 eV) m/z (intensidade relativa): 234 (15) (M^+·), 110 (100), 207 (24), 121 (50), 91 (30), 81 (26). RMN de ¹H e ¹³C: Tabela 2.

(rel)-4b,5b,7b-Eremofil-9-en-12,8b-olido (5): Óleo incolor, [α]_D²³ - 3,8 (CHCl₃; c. 0,38). IV (filme) ν_máx cm^-1: 2920; 2858; 1766; 1454 e 1161. EM (70 eV) m/z (intensidade relativa): 234 (20) (M^+·), 110 (100), 161 (40), 133 (45), 121 (50), 67 (20). RMN de ¹H e ¹³C: Tabela 2.

Ácido (rel)-4b,5b,7b-eremofilan-9a,10α-epóxi-12-oico (6): Óleo incolor, [α]_D²³ + 5,4 (CHCl₃; c. 0,38). EM (70 eV) m/z (intensidade relativa): 252 (10) (M^+·), 91 (100), 105 (70), 120 (60), 147 (57), 55 (72), 133 (20). RMN de ¹H e ¹³C: Tabela 2.

4b,5b,7b-Eremofil-11-en- 10α-ol (7): Óleo incolor. [α]_D²³ + 28,9 (CHCl₃; c. 0,18) e Lit.⁵ [α]_D²³ + 29,2 (CHCl₃; c. 0,12). RMN de ¹H (300 MHz, CDCl₃) δ_H (mult.; J em Hz; H): 1,27( m, H-1); 1,46 (m, H-2), 1,32 (m, H-3), 2,38 (dd; 6,9 e 1,9 Hz; H-4), 0,91 (m, H-6), 2,20 (dd; 11,7 e 4,7 Hz; H-7), 1,58 (m, H-8), 1,41 (m, H-9), 4,67 (sl, H-12), 1,70 (sl, H-13), 0,84 (sl, H-14), 0,77 (d; 6,9 Hz; H-15). RMN de ¹³C (75 MHz, CDCl₃) δ_C: 36,7 (C-1), 22,9 (C-2), 32,7 (C-3), 38,7 (C-4), 41,1 (C-5), 36,7 (C-6), 33,3 (C-7), 26,7 (C-8), 30,1 (C-9), 73,1 (C-10), 150,4 (C-11), 108,1 (C-12), 20,9 (C-13), 15,4 (C-14), 15,3 (C-15).

Espatulenol (8): Óleo incolor. [α]_D²³ + 7,2 (CHCl₃; c. 0,20) e Lit.⁷ [α]_D²³ + 7,2 (CHCl₃; c. 1,3). RMN de ¹H (300 MHz, CDCl₃) δ_H (mult.; J em Hz; H): 0,44 (t; 10,4 Hz; H-7), 0,69 (m, H-8), 1,02 (s, H-12), 1,03 (s, H-13), 4,64 (sl, H-14), 1,25 (s, H-15). RMN de ¹³C (75 MHz, CDCl₃) δ_C: 53,3 (C-1), 26,7 (C-2), 41,6 (C-3), 80,8 (C-4), 54,2 (C-5), 29.8 (C-6), 27,0 (C-7), 25,0 (C-8), 38,8 (C-9), 153,2 (C-10), 20,5 (C-11), 16,2 (C-12), 28,6 (C-13), 106,2 (C-14), 25,6 (C-15).

RESULTADOS E DISCUSSÃO

A substância 1 apresentou-se como um óleo incolor e em seu espectro de infravermelho destacaram-se uma banda larga em 3440 cm^-1, relativa a estiramento (O-H) de ácido carboxílico e uma banda em 1708 cm^-1, relativa a estiramento (C=O). O espectro de RMN de ¹³C apresentou um conjunto de quinze sinais, permitindo definir os seguintes grupos: uma carboxila, três metilas, cinco metilenos, dois carbonos não ligados a hidrogênios, sendo um deles quaternário e outro olefínico, e três metinos (sendo um deles olefínico). O espectro de massas de 1 apresentou pico do íon molecular (M^+·) em m/z 236, indicando, em conjunto com as informações presentes nos espectros de RMN de ¹³C e DEPT-135°, a fórmula molecular C₁₅H₂₄O₂. As características dos espectros de RMN (Tabela 1) juntamente com a relação carbono/hidrogênio constante na fórmula molecular levaram à proposta de que a substância 1 se tratava de um sesquiterpeno bicíclico e as evidências mencionadas a seguir indicaram possuir o esqueleto eremofilano.

O espectro de RMN ¹H de 1 apresentou dois dubletos em δ_H 0,76 (J = 6,7 Hz) e δ_H 1,16 (J = 7,1 Hz), referentes a duas metilas ligadas a carbonos metínicos, um singleto a δ_H 0,89, correspondente a uma metila ligada a carbono quaternário, e um sinal atribuível a um hidrogênio olefínico em δ_H 5,24 (dd, J = 5,8 e 1,3 Hz). O experimento HMBC (Esquema 1) apresentou correlações entre o sinal dos hidrogênios da metila em δ_H 1,16 e o dos carbonos metínicos a δ_C 44,3 e do carbono da carboxila a δ_C 182,7. Outras correlações observadas foram entre o hidrogênio referente ao sinal a δ_H 2,28 (dq, J = 12,2 e 7,1 Hz) e o carbono da carboxila (δ_C 182,7), o carbono da metila a δ_C 13,9 (δ_H 1,16) e o carbono metínico a δ_C 33,5, o qual mostrou estar ligado ao hidrogênio a δ_H 1,80 (m) no experimento HSQC. Estes dados indicaram que a carboxila encontra-se ligada a um carbono metínico, estando localizada na porção isopropílica de um esqueleto carbônico bicíclico do tipo eremofilano.

O experimento HSQC permitiu constatar que o carbono metilênico em δ_C 32,1 se correlaciona com os hidrogênios referentes aos sinais a δ_H 2,14 (m) e δ_H 1,85 (m), que são correlações compatíveis com a presença de um metileno alílico. Estes hidrogênios apresentaram correlações no experimento HMBC com os carbonos olefínicos a δ_C 117,2 (CH) e 146,6 (C) e com o carbono metínico a δ_C 33,5, indicando, portanto, a localização da ligação dupla entre C-9/C-10 do esqueleto eremofilano. O deslocamento químico de C-8 (δ_C 32,1) é compatível com os efeitos de desproteção dos dois grupos vizinhos, fundamentando assim a proposta estrutural para o composto 1. No experimento NOESY foram observadas correlações entre os hidrogênios da metila a δ_H 0,89 (H-14) e o hidrogênio metínico a δ_H 2,28 (H-11), indicando que ambos estão espacialmente próximos. Desta forma, o composto 1 foi caracterizado como ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofil-9-en-12-oico (Figura 1), o qual está sendo descrito pela primeira vez. Deve-se ressaltar também que, embora sejam comuns em espécies de Asteraceae e de algumas outras famílias vegetais,⁵ sesquiterpenos tipo eremofilano são inéditos em Ocotea.

A substância 2 foi caracterizada em mistura com o composto 1 e o conjunto de quinze sinais listados nos espectros RMN de ¹³C mostrou valores de deslocamentos químicos muito semelhantes aos observados para o composto 1. Da mesma forma que para este, os sinais foram relativos a uma carboxila, três metilas, cinco metilenos, dois carbonos não ligados a hidrogênio, sendo um quaternário e outro olefínico, e a quatro metinos (sendo um deles olefínico). O espectro de massas de 2 (M^+• em m/z 236) é compatível com a fórmula molecular C₁₅H₂₄O₂, indicando tratar-se de um isômero do composto 1. O experimento HMBC (Esquema 1) mostrou que os hidrogênios da metila a δ_H 1,14 (d, J = 7,1 Hz, H-13) acoplam com os carbonos metínicos a δ_C 34,8 (C-7) e δ_C 43,3 (C-11) e com o carbono da carboxila a δ_C 182,8, em um padrão muito semelhante ao observado para o composto 1.

Estas considerações levaram à proposta de que 2 possui o mesmo esqueleto carbônico e uma estrutura isomérica de 1, diferindo apenas na localização da ligação dupla. Os experimentos HMBC e HSQC permitiram efetuar as atribuições e correlações dos sinais de RMN de ¹H e ¹³C (Tabela 1), os quais se mostraram compatíveis com a localização da ligação dupla entre C-1 (δ_C 120,8) e C-10 (δ_C 143,2). O experimento NOESY mostrou correlações entre os hidrogênios H-14 a δ_H 0,90 (s) e o hidrogênio H-11 a δ_H 2,43 (m), as quais permitiram definir, da mesma forma que em 1, que os substituintes de C-7 e C-5 são cis. Desta forma, o sesquiterpeno 2 foi identificado como sendo ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofil-1(10)-en-12-oico (Figura 1), o qual está sendo descrito pela primeira vez.

No espectro de infravermelho de 3 destacaram-se uma banda larga em 3448 cm^-1, relativa a estiramento (O-H) de ácido carboxílico, e de uma banda intensa centrada em 1704 cm^-1, relativa à carboxila de ácido e de carbonila de cetona conjugada, consideravelmente mais intensa que a banda em 1654 cm^-1, relativa à ligação dupla carbono-carbono.

O espectro de RMN de ¹H da substância 3 mostrou três sinais relativos a metilas, em δ_H 0,94 (d, J = 6,6 Hz), δ_H 1,04 (s) e δ_H 1,14 (d, J = 6,6 Hz) e um singleto largo de um hidrogênio olefínico em δ_H 5,80. O espectro de RMN de ¹³C de 3 (Tabela 1) apresentou um conjunto de 15 sinais, correspondendo a uma carbonila, uma carboxila, três metilas, quatro carbonos metilênicos, quatro metínicos e dois carbonos não ligados a hidrogênios, sendo um olefínico e um quaternário. O espectro de massas forneceu um pico do íon molecular (M^+·) em m/z 250, o que permitiu propor para esta substância a fórmula molecular C₁₅H₂₂O₃. Considerando as características dos espectros de RMN, índice de deficiência de hidrogênio igual a cinco e os grupos citados, pôde-se admitir que a substância 3 seja um sesquiterpeno bicíclico. O conjunto de dados de RMN de ¹H e ¹³C de 3 tem grande semelhança com os observados para a substância 2 e a comparação dos dados de RMN ¹³C destas substâncias permitiu avançar na proposta de que a substância 3 possui esqueleto eremofilano, diferenciando-se de 2 apenas por apresentar uma carbonila adicional.

A análise mais detalhada dos dados de RMN de ¹³C (Tabela 1) destes compostos mostrou diferenças significativas entre os valores dos deslocamentos químicos relativos aos carbonos do anel A, indicando que a carbonila em 3 se encontra neste anel e, em vista de se tratar de uma carbonila conjugada (δ_C 199,4), com λ_máx em 255 nm, deve se localizar em C-2. Os carbonos que sofreram desproteções significativas em relação aos do composto 2 foram C-1 (δ_C 125,4), C-2 (δ_C 199,4), C-3 (δ_C 42,0) e C-10 (δ_C 173,9). Estas diferenças, aliadas à multiplicidade de H-1 no espectro de RMN ¹H, que se apresentou como um singleto largo, corroboram com a proposta apresentada.

No experimento HMBC (Esquema 1) observou-se que os hidrogênios da metila a δ_H 1,14 (H-13) acoplam com o carbono da carboxila a δ_C 181,2 (C-12) e com os carbonos metínicos a δ_C 33,8 (C-7) e δ_C 43,2 (C-11). Da mesma maneira que, para os compostos 1 e 2, estas correlações indicam que uma das metilas da porção isopropílica do esqueleto eremofilano encontra-se na forma de uma carboxila. Observou-se, através do experimento HMBC, também, que o hidrogênio a δ_H 5,82 (H-1) acopla com os carbonos a δ_C 39,9 (C-5) e δ_C 42,0 (C-3).

No experimento COSY ¹H - ¹H foi possível confirmar o acoplamento entre os hidrogênios em δ_H 2,39 (H-11) e δ_H 1,72 (H-7), assim como entre os hidrogênios a δ_H 1,14 (H-13) e δ_H 2,39 (H-11), que são compatíveis com os substituintes de C-7 propostos.

Desta forma, o sesquiterpeno 3 foi caracterizado como sendo ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofil-1(10)-en-2-oxo-12-oico (Figura 1), que está sendo descrito pela primeira vez.

O espectro de RMN de ¹H de 4 apresentou três sinais relativos a metilas, sendo um singleto (δ_H 0,99, s) e dois dubletos (δ_H 0,82, d, J = 6,6 Hz) e (δ_H 1,25, d, J = 7,4 Hz) referentes aos hidrogênios de duas metilas ligadas a carbonos metínicos. Mostrou também um dubleto em δ_H 5,41 (J = 3,5 Hz) relativo a hidrogênio ligado a carbono olefínico, e um duplo dubleto em δ_H 4,82 (J = 7,3 e 3,5 Hz). O espectro de RMN de ¹³C de 4 apresentou um conjunto de 15 sinais (Tabela 2), correspondentes a uma carboxila, três metilas, quatro carbonos metilênicos, cinco metínicos e dois carbonos não ligados a hidrogênios, sendo um olefínico e um carbono quaternário. O espectro de massas de 4 apresentou o pico do íon molecular (M^+·) em m/z 234, levando à fórmula molecular C₁₅H₂₂O₂. Estes dados, aliados à presença de uma ligação dupla carbono-carbono e de uma carboxila na estrutura e ao índice de deficiência de hidrogênio igual a cinco, indicam que 4 se trata de um sesquiterpeno com esqueleto carbônico bicíclico. Admitindo-se que possua também um esqueleto eremofilano, o composto 4 difere dos compostos 1-2 pela presença de um oxigênio ligado a carbono metínico sp³. O deslocamento químico do hidrogênio a δ_H 4,82, ligado ao referido carbono, indica uma desproteção compatível com uma localização alílica e com a participação num sistema lactônico. No espectro infravermelho de 4 foi observada uma banda em 1770 cm¹, relativa a estiramento (C=O) de um grupo γ-lactona, confirmando a proposta acima. No experimento COSY ¹H - ¹H foi possível observar o acoplamento entre os hidrogênios referentes aos sinais em δ_H 5,41 e δ_H 4,82, indicando a localização vicinal destes hidrogênios. O experimento HMBC (Esquema 1) para o composto 4 mostrou correlações que evidenciam a presença de uma carboxila semelhante à observada nos compostos 1-3, na porção isopropílica do esqueleto eremofilano. Estes dados, associados ao valor do deslocamento químico do carbono carboxílico (δ_C 179,8) de 4, que sofre efeito de proteção em relação ao observado para os compostos 1-3, levaram à proposição de que 4 se trata de um sesquiterpeno com esqueleto eremofilano possuindo uma ligação dupla entre C9-C10 e uma γ-lactona entre C-12 e C-8. No experimento HMBC o hidrogênio referente ao sinal a δ_H 4,82 (H-8) apresentou correlação com o carbono metilênico a δ_C 35,5 (C-6), da mesma forma que o hidrogênio a δ_H 5,41 (H-9) se correlaciona com o carbono em δ_C 43,0 (C-7). A estereoquímica da junção do anel lactônico pôde ser definida pelas constantes de acoplamento dos hidrogênios envolvidos: o duplo dubleto em δ_H 4,82 (dd, J = 7,3 e 3,5 Hz), atribuído a H-8, e o dubleto em δ_H 5,41 (d, J = 3,5 Hz), atribuído a H-9. Estes dados permitem deduzir que o valor da constante de acoplamento de H-8/H-7 é 7,3 Hz, que é compatível com uma relação pseudo trans-diaxial. Admitindo-se que o composto 4 tem a mesma configuração em C-7 (δ_C 43,0) que os compostos precedentes (1-3), pôde-se definir, então, a estereoquímica relativa da referida junção como sendo 7β,8α.

Assim, o sesquiterpeno 4 foi caracterizado como sendo (rel)-4β,5β,7β-eremofil-9-en-12,8α-olido (Figura 1), que está sendo descrito pela primeira vez.

No espectro de infravermelho de 5 foi observada, também, uma banda em 1766 cm^-1, de estiramento (C=O) de anel γ-lactônico.

O espectro de RMN de ¹H de 5 mostrou sinais muito semelhantes aos observados no espectro do composto 4, com sinais relativos a três metilas [δ_H 0, 93 (s); δ_H 0,81 (d, J = 6,4 Hz) e δ_H 1,17 (d, J = 7,3 Hz)], um dubleto em δ_H 5,54 (J = 5,3 Hz), relativo a hidrogênio olefínico e um duplo dubleto em δ_H 4,55 (J = 5,3 e 4,5 Hz).

O espectro de RMN de ¹³C apresentou um conjunto de 15 sinais (Tabela 2), os quais foram atribuídos a uma carboxila (δ_C 179,2), três metilas, quatro carbonos metilênicos, cinco metínicos, dentre os quais um é referente a um carbono carbinólico (δ_C 74,7) e outro é olefínico (δ_C 112,8), e a dois carbonos não hidrogenados, sendo um deles olefínico (δ_C 157,6).

Os dados de RMN e de infravermelho de 5 indicam que esta substância é um sesquiterpeno que possui também na sua estrutura uma γ-lactona e o espectro de massas, que apresentou o pico do íon molecular (M^+·) a m/z 234, confirma a fórmula molecular C₁₅H₂₂O₂.

A comparação dos dados de RMN de ¹H e ¹³C e de massas de 5 com os do sesquiterpeno 4 indicou grande semelhança estrutural e que estes compostos são isômeros. A análise mais detalhada destes dados mostrou uma sutil diferença estrutural entre os dois compostos, a qual resulta em pequenas diferenças de deslocamento químico dos carbonos C-7 (δ_C 34,2), C-6 (δ_C 29,8), C-9 (δ_C 112,8), C-11 (δ_C 40,4) e da metila C-13 (δ_C 9,3).

O experimento HMBC (Esquema 1) permitiu observar o acoplamento do hidrogênio olefínico H-9 (δ_H 5,54) com os carbonos em δ_C 32,2 (C-1), δ_C 34,2 (C-7), δ_C 38,5 (C-5) e δ_C 74,7 (C-8), e do hidrogênio carbinólico (δ_H 4,55, H-8) com C-6 (δ_C 29,8) e C-9 (δ_C 112,8).

O experimento COSY ¹H - ¹H mostrou os acoplamentos entre os hidrogênios vizinhos H-9 (δ_H 5,54) e H-8 (δ_H 4,55) e entre H-8 (δ_H 4,55) e H-7 (δ_H 2,37). Estas correlações são coerentes com as atribuições realizadas com base nos experimentos HMBC e HSQC e fundamentam a proposta de que 5 também possui o anel γ-lactônico entre C-7 e C-8.

Da mesma maneira que para a substância 4, a definição da estereoquímica da junção do anel γ-lactona pôde ser definida pelas constantes de acoplamento dos hidrogênios H-8 (δ_H 4,55; dd; J = 5,3 e 4,5 Hz) e H-9 (δ_H 5,54; d; J = 5,3 Hz) e, consequentemente, da constante de acoplamento H-8/H-7 (J = 4,5 Hz). Este valor de constante de acoplamento indica que a relação entre H-8/H-7 é pseudo axial-equatorial (cis).

Desta forma, a substância 5 foi definida como sendo (rel)-4β,5β,7β-eremofil-9-en-12,8β-olido (Figura 1), inédito na literatura.

O espectro de massas de 6 mostrou o íon molecular (M^+·) a m/z 252, levando à fórmula molecular C₁₅H₂₄O₃ e a um índice de deficiência de hidrogênio igual a quatro.

O espectro de RMN de ¹H para a substância 6 apresentou, entre outros, três sinais relativos a metilas [δ_H 0,78 (d, J = 7,0 Hz), δ_H 1,12 (d, J = 7,0 Hz) e δ_H 0,93 (s)], além de um duplo dubleto em δ_H 2,92 (J = 5,0 e 1,1 Hz).

O espectro de RMN de ¹³C apresentou um conjunto de 15 sinais (Tabela 2), atribuídos a três metilas, uma carboxila, cinco carbonos metilênicos, quatro carbonos metínicos e dois carbonos quaternários. Observaram-se, neste espectro, sinais relativos a dois carbonos ligados a oxigênio (δ_C 61,0-CH e 65,5-C), indicando a presença de um grupo epóxido na estrutura. O experimento HSQC evidenciou que o hidrogênio correspondente ao sinal a δ_H 2,92 encontra-se ligado ao carbono correspondente ao sinal a δ_C 61,0, enquanto o experimento HMBC mostra que o referido hidrogênio é vicinal ao carbono a δ_C 65,5. Estes dados confirmam a existência do grupo epóxido na estrutura. O experimento HMBC (Esquema 1) para o composto 6 mostrou ainda que os hidrogênios da metila a δ_H 1,12 (H-13) se correlacionam com os carbonos a δ_C 30,0 (C-7), δ_C 43,7 (C-11) e com o carbono da carboxila em δ_C 179,2 (C-12), evidenciando a presença do grupo 1-carboxi-etil, da mesma maneira que para os compostos 1-3. Observou-se também que o hidrogênio em δ_H 2,92 (H-9) acopla com os carbonos em δ_C 28,6 (C-8) e δ_C 30,0 (C-7) e os hidrogênios da metila a δ_C 17,7 (H-14) se correlacionam com os carbonos em δ_C 37,6 (C-5) e em δ_C 65,5 (C-10). A análise destes dados levou a proposta de que o composto 6 se trata de um sesquiterpeno com esqueleto eremofilano, semelhante aos compostos relatados anteriormente, possuindo um epóxido em C-9/C-10 e o carbono 12 como uma carboxila de ácido.

No experimento NOESY de 6 foram observadas correlações entre os hidrogênios a δ_H 0,78 (H-14) e o hidrogênio a δ_H 1,31 (H-11), indicando que ambos estão espacialmente próximos. A estereoquímica para o grupo epóxido foi proposta com base no deslocamento químico de C-14 (δ_C 17,7), indicando uma relação trans na junção dos anéis (C-5 e C-10).

A análise dos dados de RMN do composto 6 mostraram-se compatíveis com a estrutura de um sesquiterpeno bicíclico com esqueleto eremofilano, correspondente ao ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofilan-9α,10α-epóxi-12-oico (Figura 1), inédito na literatura.

As substâncias 7 e 8 (figura 1) foram identificadas através das análises dos espectros de RMN ¹H e ¹³C, seguidas pela comparação com dados descritos na literatura, como sendo os sesquiterpenos 4β,5β,7β-eremofil-11-en-10α-ol (7)⁵ e o espatulenol (8).⁶ No processo de elucidação estrutural dos sesquiterpenos com esqueleto eremofilano 1 a 6, os dados de RMN destes compostos foram comparados com os de compostos com estruturas semelhantes já descritos na literatura,⁷ observando-se compatibilidade entre os deslocamentos químicos.

CONCLUSÃO

O estudo químico das folhas de um espécime de Ocotea lancifolia coletadas na região do Rio Guariroba no município de Campo Grande - MS, Brasil, levou ao isolamento de oito sesquiterpenos (1-8). As substâncias ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofil-9-en-12-oico (1), ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofil-1(10)-en-12-oico (2), ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofil-1(10)-en-2-oxo-12-oico (3), (rel)-4β,5β,7β-eremofil-9-en-12,8α-olido (4), (rel)-4β,5β,7β-eremofil-9-en-12,8β-olido (5) e ácido (rel)-4β,5β,7β-eremofilan-9α,10α-epóxi-12-oico (6) são inéditas, enquanto 4β,5β,7β-eremofil-11-en-10α-ol (7) é inédito em Lauraceae e o espatulenol (8) já foi obtido de outras espécies vegetais. Este é o primeiro registro de isolamento de sesquiterpenos do tipo eremofilano em Ocotea, e o segundo em Lauraceae, havendo um relato em Lindera strychnifolia.⁵ Não foi caracterizada a presença de alcalóide na parte aérea da planta.

AGRADECIMENTOS

À FUNDECT-MS, CNPq, CAPES, CPq-PROPP/UFMS pelo apoio financeiro e ao Dr. F. M. Alves (DBI/UFMS) pela identificação do material botânico.

MATERIAL SUPLEMENTAR

Espectros de RMN de ¹H, ¹³C, HSQC, IV, UV/Visível, e experimentos HMBC, COSY, NOESY das substâncias isoladas de folhas de Ocotea lancifolia estão disponíveis gratuitamente em http://quimicanova.sbq.org.br, na forma de arquivo PDF.

REFERÊNCIAS

1. Baitello, J. B.; Acta Bot. Bras. 2001, 15, 450.

2. Garcez, W. S.; Yoshida, M.; Gottlieb, O. R.; Phytochemistry 1995, 39, 815; Lordello, A. L. L.; Massayoshi, Y.; Phytochemistry 1997, 46, 741; Garcez, F. R.; Garcez, W. S.; Hamerski, L.; Miranda, A. C. M.; Quim. Nova 2010, 33, 1739; Garcez, F. R.; Silva, A. F. G.; Garcez, W. S.; Linck, G.; Matos, M. F. C.; Santos, E. C. S.; Queiroz, L. M. M.; Planta Med. 2011, 77, 383.

3. Marques, C. A.; Floram. 2001, 8, 540; Rizzini, C. T.; Mors, W. B.; Botânica Econômica Brasileira, EPU/EDUSP: São Paulo, 1976.

4. Fournet, A.; Ferreira, M. E.; Arias, A. R.; Guy, I.; Guinaudeau, H.; Heinzen H.; Fitoterapia 2007, 78, 382.

5. Itokawa, H.; Morita H.; Kobayashi, T.; Watanabe, K.; Itaka, Y.; Chem. Pharm. Bull. 1987, 35, 2860.

6. Tringali, C.; Piattelli, M.; Spatafora, C.; Phytochemistry 1995, 40, 831.

7. Amaral, L.; Filho, E. R.; J. Braz. Chem. Soc. 2010, 21, 1450; Zhao, Y.; Schenk, D. J.; Takahashi, S.; Chappel, J.; Coates, R. M.; J. Org. Chem. 2004, 69, 7428; Perez-Castorena, A. L.; Arciniegas, A.; Guzman, S. L.; Villaseñor, J. L.; de Vivar, A. R.; J. Nat. Prod. 2006, 69, 1471.

Recebido em 20/11/12

Aceito em 4/3/13

Publicado na web em 24/5/13

Material Suplementar

O material suplementar está disponível em pdf: [Material Suplementar]

Datas de Publicação

• Publicação nesta coleção
  12 Set 2013
• Data do Fascículo
  2013

Histórico

• Recebido
  20 Nov 2012
• Aceito
  04 Mar 2013